Реактивные изменения поведения крыс в динамике эстрального цикла

МИНИСТЕРСТВО ОБРАЗОВАНИЯ И НАУКИ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ
ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ
«БАШКИРСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Биологический факультет
Кафедра физиологии человека и зоологии

ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИЦИОННАЯ РАБОТА БАКАЛАВРА
Сагадеева Алия Алифовна
Реактивные изменения поведения крыс в динамике эстрального цикла
                                                          Выполнила:
                                                          Студентка  4 курса очной формы обучения
                                                          Направление подготовки
                                                          (специальность): Биология
                                                          Направленность (профиль): Генетика
Допущено к защите в ГЭК и проверено на
объем заимствования:
Заведующий кафедрой                                               Руководитель  
Д.б.н.,профессор                                                         к.б.н.,ст.преп.
____________ / Хисматуллина  З.Р.                          _________/ Садртдинова И.И.
 «___» _________ 2017г.                                                           


Уфа – 2017


СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ…………………………………………………………………………3-4
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………5
    1.1 М?о?р?ф?о?ф?у?н?к?ц?и?о?н?а?л?ь?н?ы?е изменения женской репродуктивной с?и?с?т?е?м?ы…………………………………………………………………………….5-11
    1.2 Понятие эстрального цикла и его этапы…………………………11-13
    1.3 Эстральный цикл у крыс………………………………………….13-14
    1.4 Поведенческие эффекты женских половых гормонов…………………..14-16 
    1.5 Поведенческие особенности  крыс линии WAG/Rij……………………..16-17
Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ………………………..18
     2.1 Объекты исследования…………………………………………………..18
     2.2 Методы исследования………………………………………………..18-26
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ…………..27
     3.1 Изучение  эстрального цикла методом влагалищных мазков……27-29
     3.2 Исследование уровня тревожности крыс в зависимости от эстрального цикла……………………………………………………………………………..29-36
     3.3 Оценка уровня депрессивности самок крыс в зависимости от эстрального цикла………………………………………………………………...36-39 
    3.4 Оценка когнитивного поведения самок крыс в зависимости от эстрального цикла…………………………………………………………...39-41
ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………...42
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………………..43-47





     ВВЕДЕНИЕ
     В последние годы поведенческие особенности  животных  привлекают все внимание исследователей и ученых самых различных профессий.  Институты физиологии и психологии исследуют поведение человека и животных с помощью  разнообразных  методов и подходов.  Исследователям-зоологам  при работе по систематике, исследований по ориентации и адаптации животных необходимо изучение поведения животного мира. При одомашнивании и содержании животноводами сельскохозяйственных животных необходима роль поведенческих особенностей. Кроме того, исследование поведения животных играет важную роль в развитии бионики[35].
     Известно, что поведение - это физиологический процесс, представляющий собой адаптивную связь между организмом и окружающей средой. Ответная реакция организма изменяется в связи с изменением среды потому, что организмы взаимодействуют с живой или неживой  окружающей средой. Поведение, как мы понимаем, это активные изменения или  направленные действия, которые  способствуют выживанию[18]. По литературным данным, эстрогены и прогестерон выполняют функцию, которая отвечает за  контроль полового поведения.  Как писал Бич, поведение самок значительно сложный процесс и  его необходимо  рассмотреть его в целом[41].    
     Теоретическую модель, предложенная Лешнером из обзора многочисленных исследований гормонов и агрессивного поведения, учитывает гормональный статус организма, влияние окружающей среды, развитие и свойства самого животного как объекта, вызывающего агрессивную реакцию [51].
     Результаты, полученные в различных условиях на крысах разных линий (Wistar, Sprague-Dawley, Long-Evans, Fisher 344, WAG/Rij, SHR и др.), показывают существование определенной зависимости поведения от стадии эстрального цикла, что связывается с циклическими изменениями концентрации половых стероидов в плазме и в ткани мозга [11].
     Поскольку, железы внутренней секреции и нервная система имеют общие функции коммуникации и координации внутри организма следует обратить внимание на взаимодействие половых гормонов и поведенческих особенностей. Гормоны, которые циркулируют в крови, часто  рассматриваются как первичные мотивирующие факторы поведения животных, а измененный  их уровень внутренними и внешними  факторами отражается на особенностях поведения. Работы, посвященные ориентировочно-исследовательской деятельности занимают основное место в психофизиологических исследованиях. Однако воздействие гормональных факторов на высшие функции головного мозга неоднозначно и характеризуется множественностью физиологических эффектов. Поэтому в  настоящее время построение модели, которая  отражала бы зависимость между уровнем гормонов в организме и его влиянием на высшие функции мозга, представляется актуальным [35].
     Исходя из вышеизложенного,  целью работы стало исследование поведенческих особенностей крыс линий Wistar и WAG/Rij в зависимости от стадии эстрального цикла.   
     В соответствии с целью исследования, были были поставлены следующие задачи:     
1.     Определить регулярность половых циклов у самок крыс линии Wistar и WAG/Rij.
2.      Выявить уровни тревожности в динамике эстрального цикла у самок крыс линии Wistar и WAG/Rij.
3.     Исследовать уровень депрессивности в динамике эстрального цикла у самок крыс линии Wistar и WAG/Rij.
4.     Изучить нарушения когнитивных функций у самок крыс линии Wistar  и WAG/Rij в динамике эстрального цикла.


Глава 1. Обзор литературы
1.1 М?о?р?ф?о?ф?у?н?к?ц?и?о?н?а?л?ь?н?ы?е изменения женской репродуктивной с?и?с?т?е?м?ы
      Яичники – это парный орган, который выполняет эндокринную (продукция половых гормонов) и репродуктивную (формирование женских половых клеток) функции. Они расположены  асимметрично на заднем листке широкой связки в малом тазу и  прикреплены нижним краем к короткой части  мезовария. У  каждого яичника имеется  две связки: собственная связка  яичника связывает яичник с маткой, которая заканчивается несколько ниже и позади маточной трубы и воронко-тазовая связка, которая направляется к боковой стенки таза от верхнего полюса яичника. В них и через мезоварий проходит основная часть нервов, лимфатических и кровеносных сосудов[44]. 
     У я?и?ч?н?и?ка функционирование цикличное и, поэтому, его с?т?р?о?е?н?и?е зависит о?т наличия беременности или от стадии эстрального цикла[26]??. 
      С наружней стороны, кроме о?б?л?а?с?т?и ворот, яичник п?о?к?р?ы?т эпителием, которого и?м?е?н?уют по-разному?ютюь? покровной, поверхностный, з?а?ч?а?т?к?о?вый, или г?е?р?м?и?н?а?т?и?в?н?ы?й [13]. 
     С поверхности я?и?ч?н?и?к окружен п?л?о?т?н?о?й волокнистой соединительн?о?й тканью - белочной оболочкой, покрытой м?е?з?о?т?е?л?и?е?м. Остальная часть  поверхности м?е?з?о?т?е?л?и?я обеспечена м?и?к?р?о?в?о?р?с?и?н?к?а?м?и[4]. 
     Яичник состоит из коркового и м?о?з?г?о?в?о?го вещества. Корковое в?е?щ?е?с?т?в?о расположено на периферии  яичника и х?а?р?а?к?т?е?р?и?з?у?е?т?с?я наличием овариальных ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в. Мозговое вещество свободно от фолликулов и находится посередине яичника. В нем р?а?с?п?о?л?а?г?а?ю?т?с?я крупные органные с?о?с?у?д?ы, распадающиеся н?а более мелкие и, уходящие в корковое вещество,  в?е?т?в?и. С?п?е?ц?и?а?л?и?з?и?р?о?в?а?н?ная?ая? рыхлая волокнистая с?о?е?д?и?н?и?т?е?л?ь?ная?ая? ткань -  стромальная часть этих веществ я?и?ч?н?и?к?а и рпедставляет собой производную мезенхимы[14]. 
           Соединительнотканная с?т?р?о?м?а  является о?с?н?о?в?о?й обоих в?е?щ?е?с?т?в?. В корковом веществе о?н?а представлена из м?е?ж?к?л?е?т?о?ч?н?о?г?о вещества и лежащих плотно фибробластов, а в мозговом в?е?щ?е?с?т?в?е состоит из большого к?о?л?и?ч?е?с?т?ва?аа? неупорядоченных эластических в?о?л?о?к?о?н, гладкомышечных клеток и огромного числа кровеносных с?о?с?у?д?о?в. И преобладающая часть к?р?о?в?е?н?о?с?н?ы?х сосудов сосредоточена в этом веществе [1,14]??. 
             Т?о?л?щ?и?н?а коркового вещества постепенно возрастает о?т рождения до р?е?п?р?о?д?у?к?т?и?в?н?о?г?о периода онтогенеза, а потом ? медленным т?е?м?п?о?м уменьшается. Толщина мозгового в?е?щ?е?с?т?в?а –в п?е?р?и?о?д новорожденности самая наименьшая, а в п?е?р?и?о?д старости -наибольшая [50].
           К?о?р?к?о?в?о?е вещество состоит и?з в?е?р?е?т?е?н?о?в?и?д?н?ы?х тесно расположенных клеток, напоминающих н?а?б?у?х?ш?и?е фибробласты, и  межклеточного в?е?щ?е?с?т?в?а, которого очень  мало. Но его тонкая внешняя зона представляет собой п?о?л?о?су?уу коллагеновой стромы, к?о?т?о?р?а?я содержит относительно м?а?л?о клеток. Внутренняя зона коркового вещества я?и?ч?н?и?к?о?в состоит из фолликулов, я?в?л?я?ющихся основной с?т?р?у?к?т?у?р?н?о?-?ф?у?н?к?ц?и?о?н?а?л?ь?н?о?й единицей [9].
             Фолликулы п?о?д?р?а?з?д?е?л?я?ю?т?с?я на примордиальные, п?е?р?в?и?ч?н?ы?е, вторичные ?и третичные(Граафовы), согласно Международной гистологической номенклатуры(1999). Их  р?а?з?в?и?т?и?е происходит п?о схеме: примордиальный ? п?е?р?вичный ? вторичный ? т?р?е?т?и?ч?н?ы?й [21]. Начало развития п?р?и?м?о?р?д?и?а?л?ь?н?ы?х фолликулов  спиралевидных а?р?т?е?р?и?й и п?р?и?м?о?р?д?и?а?л?ь?н?ы?х фолликулов отмечается с периода полового созревания. В репродуктивный период ф?о?л?л?и?к?у?л?ы расположены в строме к?о?р?к?о?в?о?г?о вещества, приморд?и?а?л?ь?н?ы?е – на  периферии, а зреющие  в б?о?л?е?е глубоких зонах[25,51].
              Примордиальный ф?о?л?ликул состоит и?з одного с?л?оя?я? плоских фолликулярных к?л?е?т?о?к ооцита первого п?о?р?я?д?к?а. Ооцит - к?л?ю?ч?е?в?ой? элемент, основа функционального и структурного единства ф?о?л?л?и?к?у?л?я?р?н?о?г?о комплекса [49].
             В примордиальных фолликулах г?р?а?н?у?л?е?з?н?ы?е клетки небольших р?а?з?меров. В дальнейшем у?в?е?л?и?ч?и?в?а?е?т?с?я число и размеры г?р?а?н?у?л?е?з?ы. Они стан?о?в?я?т?с?я кубическими, цилиндрическими, ф?о?р?м?и?р?у?ю?т несколько слоев [27,28].
              На р?а?н?н?и?х этапах фолликулогенеза д?и?н?а?м?и?к?а размеров ооцита п?р?о?п?о?р?циональна росту п?р?и?м?о?р?д?и?а?л?ь?н?о?г?о фолликула [33]. П?е?р?в?и?ч?н?ы?е фолликулы образованы о?о?ц?и?т?о?м первого порядка, о?к?р?у?женным несколькими с?л?о?я?м?и фолликулярных клеток к?у?б?и?ч?е?с?к?о?й, цилиндрической и?л?и округлой формы. П?о мере созревания ф?о?л?л?и?к?у?л?а веретенообразные к?л?е?т?к?и слоями окружают ф?о?л?л?и?к?у?л, увеличиваются в объеме, с?т?а?н?о?в?я?т?с?я эпителиоидными. П?о периферии остаются с?л?о?и веретенообразных клеток, с?л?и?в?а?ю?щ?и?е?с?я со стромой.?
             Вторичный фолликул окружен н?а?р?у?ж?н?е?й и внутренней текой, полость выстлана гранулезными к?л?е?т?к?а?м?и. В яичнике одновременно р?а?з?в?иваются?ваются? несколько полостных ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в, но  доминантным становится только о?д?и?н [12,13,24]. 
     Он заполняется фолликулярной ж?и?д?костью по мере роста, оттесняет я?й?ц?е?к?л?е?т?к?у к одному из п?о?л?ю?с?о?в, и превращается в граафов п?у?з?ы?р?е?к. В я?й?ц?е?н?о?с?н?о?м холмике располагается яйцеклетка. С верхней стороны о?н?а покрывается лучистым венцом, б?л?е?с?т?я?щ?е?й и зернистой оболочками. [1,12,26].?
           Яйцеклетка с фолликулярной жидкостью выбрасывается в результате разрастания Граафова пузырька. На месте фолликула п?о?с?л?е овуляции и выброс?а яйцеклетки образуется ж?е?л?т?о?е тело [12].
     При о?ц?е?н?к?е этапов  развития ф?о?л?л?и?к?у?л?а по основным м?о?р?ф?о?л?о?г?и?ч?е?с?к?и?м признакам (форма и к?о?л?и?ч?е?с?т?в?о слоев фолликулярных к?л?е?т?о?к, наличие лак?у?н?) выделяют такие  г?р?у?п?п?ы, как: 
-примордиальные, 
-в?с?т?у?п?и?в?ш?и?е в рост однослойные ф?о?л?л?и?к?у?л?ы, 
-однослойные ф?о?л?л?и?к?у?л?ы с примордиальными ??, 
-двуслойные,
-м?н?о?г?о?с?л?о?й?н?ы?е, 
-лакунарные??.
     Ф?о?л?л?и?к?у?л?о?г?е?н?е?з делится н?а стадии: 
1?) формирование пула р?а?с?т?у?щ?и?х фолликулов; 
2) б?а?з?а?л?ь?н?ы?й рост (рост д?о стадии антрального ф?о?л?л?и?к?у?л?а 4-го класса); 
?3) селекция и с?о?з?р?е?в?а?н?и?е доминантного фолликула.
     З?а?в?и?с?и?м?о?с?т?ь первых д?в?у?х этапов от г?и?п?о?ф?и?з?а?р?н?ы?х гонадотропинов, преимущественно о?т FSH, является н?е?п?р?я?м?о?й и скорее опосредована в?н?у?т?р?и?я?и?ч?н?и?к?о?в?ы?м?и факторами, и л?и?ш?ь последний этап н?а?п?р?я?м?у?ю регулируется гипофизом [12]. ?Несомненна р?о?л?ь факторов клеточной а?д?г?е?з?и?и и других факторов, о?т?вечающих за м?е?ж?к?л?е?т?о?ч?н?ы?е взаимодействия. В миграции первичной п?о?л?о?в?о?й клетки участвуют и?н?т?е?г?р?и?н?ы ? 3,6, ?  [47]?.  В агрегации к?л?е?т?о?к при колонизации у?р?о?г?е?н?и?тальных гребешков и?г?р?а?ю?т важную роль Е?-?к?а?д?е?р?и?н и Р-кадерин,  которые э?к?с?п?р?е?с?с?и?р?у?ю?т?с?я в предшественниках клеток С?е?р?т?о?л?и [46]. В образовании фолликулов и у?с?т?а?новлении взаимодействия о?о?ц?и?т?а и окружающих соматических к?л?е?т?о?к несомненна роль ф?а?к?т?о?р?о?в клеточной адгезии к?о?н?н?е?к?с?и?н?о?в. Так, у крыс, д?е?ф?и?ц?и?т?н?ы?х по коннексину С?Х?4?3, имеются серьезные н?а?р?у?ш?е?н?и?я в образовании п?р?и?м?о?р?д?и?а?л?ь?н?ы?х фолликулов [56]. Р-селектин и?г?р?а?е?т важную роль н?а начальных стадиях д?и?а?п?е?д?е?з?а лейкоцитов из к?р?о?в?о?т?о?к?а во время в?о?с?п?а?л?е?н?и?я [55].
           М?о?з?г?о?в?о?е вещество яичников обраазовано рыхлой с?о?е?д?и?н?и?т?е?л?ь?н?о?й тканью.  Вокруг  нервных стволиков  и сосудов н?е?р?е?д?к?о определяются маленькие пучки из полигональных или округлых к?л?е?т?о?к эпителиоидного вида. Э?т?и клетки - рудиментарные остатки  г?о?н?а?д, проходящих примитивную д?в?у?п?о?л?у?ю фазу развития. О?н?и напоминают интерстициальные э?л?е?м?е?н?т?ы яичек из-за  выработки стероидов. Ф?о?л?л?и?к?у?л?о?ц?и?т?ы гранулезной обол?о?ч?к?и, текоциты внутренней т?е?к?и, текоцитоподобные клетки с?т?р?о?м?ы являются стероидпродуцирующими клетками яичников [44]. 
               В литературных источниках н?е?т единого мнения о с?т?р?о?е?н?и?и стромы яичника. П?о данным Б?о?р?о?в?о?й Т. Г. (?1?9?9?3?), строма яичников п?р?е?д?с?т?а?в?ляет собой?яет яе? самый «простой вариант»  рыхлой с?о?е?д?и?н?и?т?е?л?ь?н?о?й ткани, практически е?д?и?н?с?т?в?е?н?н?ы?м?и клеточными э?л?е?м?е?н?т?а?м?и, которой в корковом и м?о?з?г?о?в?о?м веществе являются ф?и?б?р?о?б?л?а?с?т?ы и фиброциты. Помимо э?т?о?г?о, в мозговом веществе п?р?и?с?у?т?с?т?в?у?ют т?у?ч?н?ы?е и гладкомышечные клетки, небольшое к?о?л?и?ч?е?с?т?в?о л?е?й?к?о?ц?и?т?о?в разной формы. По данным д?р?у?г?и?х исследователей строма она представлена двумя видами клеток: 
1. в?е?р?е?т?е?н?о?о?б?р?а?з?н?ы?е, со скудной ц?и?т?о?п?л?а?з?м?о?й, похожие на ф?и?б?р?о?б?л?а?сты, располагающиеся в п?л?о?т?н?о?й сети волокон с р?а?з?л?и?ч?н?ы?м?и количествами коллагена;
2. полигональные, с эозинофильной ц?и?т?о?п?л?а?з?м?о?й, свойственными стер?о?и?д?о?п?р?о?д?у?ц?и?р?у?ю?щ?и?м клеткам ультраструктурными о?с?о?б?е?н?н?о?с?т?я?м?и, богатые л?и?п?и?д?н?ы?м?и включениями [8].
      С?о?г?л?а?с?н?о современным представлениям, о?с?н?о?в?н?о?й морфологический признак с?т?а?р?е?ю?щ?е?й гонады – гиалиноз а?р?т?е?р?и?й, наблюдается не т?о?л?ь?к?о в яичниках менопаузального в?о?з?р?а?с?т?а. Вены при э?т?о?м компенсаторно расши- р?я?ю?т?с?я, гиалиноз венозных с?о?с?у?д?о?в практически не в?с?т?р?е?ч?а?е?т?с?я. Для инволюционного т?и?п?а строения яичника х?а?р?а?к?т?е?р?н?ы?м?и признаками я?в?л?я?ю?т?с?я: крупнобугристая поверхность э?т?о?г?о органа, утолщение б?е?л?о?ч?ной оболочки, с?к?л?е?р?о?з стромы, немногочисленность р?а?з?н?ы?х форм фолликул?о?в, многочисленность фиброзных и б?е?л?ы?х тел [28].
       О?в?у?л?я?ц?и?я –это динамическое явление, которое характеризуется в?о?с?п?а?л?и?т?е?л?ь?н?ы?м выбросом макрофагами цитоктнов [56]. Однако, т?о?ч?ной?ой? роли в?о?с?п?а?л?и?т?е?л?ь?н?ы?х и иммунологических событий в овул?я?ц?и?и остается невыясненной. М?о?н?о?ц?и?т?ы, макрофаги,  ацидофильные г?р?а?н?у?л?о?ц?и?ты, и н?е?й?т?р?о?ф?и?л?ы, инфильтрируют область, о?к?р?у?ж?а?ю?щ?у?ю доминирующий фолликул п?е?р?е?д овуляцией. Проникновение л?е?й?к?о?ц?и?т?о?в, особенно нейтро- ф?и?л?о?в, наблюдается в theca с?л?о?е яичника у человека  [52] ?и крысы  непосредственно перед о?в?у?л?я?ц?и?е?й. Стромальные макрофаг?и могут быть в?о?в?л?е?ч?е?н?ы в регуляцию фолликулярного р?о?с?т?а и разрыва, рег?у?л?я?ц?и?ю эстрального цикла [59].? 
           Только о?г?р?а?н?и?ч?е?н?н?о?е число примордиальных ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в в яичниках млекопитающих р?а?с?т???т и дифференцируется, достигая с?т?а?д?и?и доминантного фолликула и в?п?о?с?л?е?д?с?т?в?и?и овулирует. 99% ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в в яичнике подверг?а?ю?т?с?я атрезии на р?а?з?л?и?ч?н?ы?х стадиях развития. В р?е?п?р?о?д?у?к?т?и?в?н?о?м возрасте атрезия с?о?в?м?е?с?т?н?о с формированием доминантного ф?о?л?л?и?к?у?л?а является одн?и?м из проявлений ф?и?з?и?о?л?о?г?и?и овариальной функции и ф?о?л?л?и?к?у?л?о?г?е?н?е?з?а: в ходе роста ф?о?л?л?и?к?у?л?ы соревнуются за л?и?д?е?р?с?т?в?о, и поступательное развит?и?е продолжают только т?е из них, к?о?т?о?р?ы?е способны обеспечить о?п?т?и?м?а?л?ь?- ное морфофункциональное с?о?с?т?о?я?н?и?е собственного гистиона. В т?е?ч?е?н?и?е жизни в яичниках ч?е?л?о?в?е?к?а прогрессивно сокращается с?о?д?е?р?ж?а?н?и?е половых клеток. С?р?а?в?н?и?т?е?л?ь?н?о небольшой процент э?т?о?й убыли связан с с?о?з?р?е?в?а?н?и?е?м и овуляцией ооцитов в р?е?п?р?о?д?у?к?т?и?в?н?о?м периоде, и значительно б?о?л?ь?ш?и?й - с атрезией овариальных ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в и гибелью половых к?л?е?т?о?к, происходящими п?р?а?к?т?и?ч?е?с?к?и в течение всей ж?и?з?н?и. Апоптоз – фундаментальный м?е?ханизм фолликулярной а?т?р?е?з?и?и и постовуляторного регресса у м?л?е?к?о?п?и?т?а?ющих  [61].
            Со в?р?е?м?е?н?ем наступления половозрелости п?о?л?о?в?ы?е органы самки п?о?д?вержены циклическим и?з?м?е?н?е?н?и?я?м, которые протекают в о?р?г?а?н?и?з?м?е при участии н?е?й?р?о?э?н?д?о?к?р?и?н?н?ы?х стимулов и находятся п?о?д влиянием факторов в?н?е?ш?н?е?й и внутренней среды,  к?о?т?о?р?ы?е, вероятно, оказывают в?л?и?я?н?и?е на ре- п?р?о?д?у?к?т?и?в?н?у?ю функцию. Менструальная ф?у?н?к?ц?и?я у женщин может н?а?р?у?- шаться под д?е?й?с?т?в?и?е?м[28].
          В результате а?н?т?р?о?п?о?г?е?н?н?ы?х влияний растет ч?и?с?л?о экологически за?висимых патологических н?а?р?у?ш?е?н?и?й в женской репродуктивной с?и?с?т?е?м?е. Так, по д?а?н?н?ы?м Губаревой Л. И. (2001), в яичниках к?р?ы?с, подвергавшихся воздействию с?у?л?ь?ф?и?д?а и кадмия, наблюдается г?и?б?е?л?ь значительной части ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в на разных с?т?а?д?и?я?х созревания. Таким о?б?р?а?з?о?м, яичник является у?н?и?к?а?л?ь?н?ы?м органом, в котором в т?е?чении жизни ж?е?н?щ?и?н?ы происходит постоянная п?е?р?е?с?т?р?о?й?к?а микроциркуляторного р?у?с?л?а, компонентов внеклеточного м?а?т?р?и?к?с?а, миграция лейкоцитов и т?у?ч?н?ы?х клеток, формирование и р?о?с?т различных функциональных с?т?р?у?к?тур: малых, с?р?е?д?н?и?х, больших и атретических ф?о?л?л?и?к?у?л?о?в, ж?лтых тел. Н?а основании данных л?и?т?е?р?а?т?у?р?ы можно заключить, ч?т?о генеративная и эндок?р?и?н?н?а?я функция яичников р?е?г?у?л?и?р?у?е?т?с?я сложным комплексом г?у?м?о?р?а?л?ь?ных факторов [17].
1.2 Понятие эстрального цикла и его этапы
           Под эстральным циклом понимается морфологические изменения, которые происходят циклически в генеративной системе самок, во время которого происходит созревание гамет и их выход в брюшную полость во время овуляции. Регуляцию эстрального цикла обеспечивают гормоны гипоталамо-аденогипофизарной конструкции  и женской половой железы. Эстральный цикл делится на четыре фазы: проэструс (предтечка), эструс (течка), метаэструс (послетечка) и диэструс (межтечка). Каждая из фаз характеризуется определенным функциональным и морфологическим состоянием слизистой влагалища, а также его гладко-мышечного слоя [8].
            Подготовительной фазой эстрального цикла является проэструс. Усиливается продукция гонадотропоцитами аденогипофиза ФСГ под влиянием либеринов гипоталамуса.На данном этапе они переходят в стадию роста и начинают вырабатывать эстрогены. Их основной целью является матка. На данной фазе наблюдаются следующие изменения – слизистая оболочка начинает набухать и утолщаться, количество железистых клеток резко увеличивается, который начинают образовывать жидкий секрет, при этом происходит углубление желез и их разветвивание [36]. 
            Следующая фаза – это фаза эструса. В крови по понятию обратной связи начинается нарастание концентрация эстрогенов,повышение продукции в гипоталамусе статинов. При этом происходит подавление секреции ФСГ  и лю-либеринов, следовательно, в гонадотропоцитах аденогипофиза начинается секреция лютеинизирующего гормона (ЛГ). В результате того, что произошел рост концентрации в крови ЛГ, разрываются стенки зрелого фолликула в женской половой железе. Происходит овуляция, следствием чего в крови скапливаются  эстрогены. Особенностью эструса является видовая специфика. В это время происходит  обильное выделение слизи из наружных половых органов, во время которой матка готова принять зародыш [36].
            Третьей фазой является метаэструс. Во время данной фазы в том месте, где лопнул зародыш образовывается желтое тело, основной целью которого является выработка прогестерона. Его основной целью является матка, в которой уже наблюдаются выраженные изменения в эндометрии. Эндометрий имеет наибольшую величину в периоде роста желтого тела. При этом железы становятся более глубокими и развлетленными. Гландулоциты начинают выделение густого секрета, который насыщен глюкогеном. В сосудах эндометрия наблюдается переполнения крови. Матка находится на стадии ожидания зародыша [36]. 
            Последней стадией эстрального цикла является диэструс. В случае, если желтое тело не оплодотворилось, оно начинает увядать. Количество прогестерона в крови снижается, и описанные ранее процессы начинают протекать в обратном порядке. 
             Таким образом, в аденогипофизе  продукции   ЛГ и ФСГ протекают не в одно и то же время, в связи, с чем в яичнике секреция эстрогена последовательно сменяется продукцией прогестерона и, наоборот, в результате чего в половой системе самок протекают циклические изменения.
1.3 Эстральный цикл у крыс
          Интервал эстрального цикла у мышей и крыс составляет 4-6 дней.  Эстральный цикл продолжатся до наступления беременности. Во время беременности, протекающей 19-20 дней деятельность полового аппарата не наблюдается. У  крыс наступает течка на следующий день. После этого наступление эстрального цикла происходит только после завершения периода лактации [19].
           Если процесс спаривания не закончился оплодотворением, либо в результате проведенного эксперимента наблюдается ложная беременность, то в матке и влагалище наблюдается изменения, длительность которых составляет 11 суток. значительные изменения влагалищных мазков и эпителия матки на морсикх свинках показали Stockard и Papanicolaou . 
           Когда влагалище находится в стадии покоя, оно покрыто  слоями плоского эпителия. Вагинальные мазки содержат большой уровень лейкоцитов и малое количество эпителиальных клеток с ядрами. 
            В период течки клетки верхнего слоя слизистой оболочки влагалища отшелушиваются и происходит потеря ядер. В пробах мазка, которые были сделаны во время течки, находится достаточно большое количество данных чешуйчатых клеток. При этом наблюдается усиление секреции влагалищных желез. 
           Когда наступает стадия послетечки видно, что  лейкоцитарная инфильтрация стенки влагалища исчезает на стадии покоя. После чего в мазках можно наблюдать  не большое количество клеток эпителиальных и большое число лейкоцитов.
           Те изменения, которые были описаны, сопровождаются теми или иными видоизменениями матки.  Во время предтечки она растет, железы ее расширяются  и начинают выделять  жидкость, растягивающая орган. после происходит дегенерация маточного эпителия и лейкоцитарная инфильтрация эндо- и миометрия. Затем эпителий восстанавливается, лейкоциты исчезают, и эндометрий приобретает способность образовывать децидуальные клетки при последующем спаривании. 
1.4 Поведенческие эффекты женских половых гормонов.
     Женский половой  гормон - эстроген, вызывающий у женского пола ощущение благополучия и удовлетворения, обуславливающий манеру поведения (стремление нянчить свое потомство и защищать свое гнездышко). Эффект эстрогенов на ЦНС делится геномный и негеномный. При первом влияние действия женских половых гормонов проходит  через  синаптические контакты и мозговые структуры с помощью  специфических рецепторов. Стероиды, которые циркулируют в крови, влияют на функции комплекса, участвующего в организации висцеральных, мотивационных и эмоциональных реакций организма. Геномные эффекты постоянны и контролируют нейронную архитектонику. Негеномные эффекты эстрогенов затрагивают механизмы нейропередачи: изменение концентрации и доступности серотонина и норадреналина, увеличение времени деградации моноаминоксидазы (фермент, метаболизирующий  и усиливающий транспорт серотонина), вытеснение триптофана из связанного состояния с альбумином плазмы, что повышает число свободного триптофана, поступающего в мозг, где и превращается в серотонин. Подтверждение  важности  этих моноаминных нейротрансмиттерных систем в регуляции настроения есть заслуга влияния женских половых гормонов на обмен норадреналина и серотонина в центральной нервной системе. Они оказывают серотонинэргический эффект (повышение активности серотонина). Ряд научных исследований указывают на положительный эффект применения заместительной гормональной терапии на настроение и чувство общего благополучия у женщин в постменопаузе, включая женщин с отсутствием психологических симптомов. Также выявлено, что женские половые гормоны купируют такие симптомы, как тревогу, снижение самооценки и депрессивное настроение. Эcтрогены оказывают влияние на ЦНС, и на психическую сферу в частности, посредством нескольких механизмов. Одним из них является прямое психотропное (психостимулирующее и антидепрессивное) действие эстрогенов за счет их серотонинэргического и адренергического эффектов. С другой стороны, вследствие уменьшения вазомоторных симптомов (приливов жара, потливости) улучшается общее самочувствие и психическое состояние пациенток («домино-эффект») [16].
     Существуют еще гормон, влияющий на состояние женщины,-прогестерон.  Известно, что среди хорошо изученных эндокринных и репродуктивных эффектов, он  играет главную роль в регуляции пластических процессов в головном и спинном мозге, периферической нервной системе.  Также установлено, что он синтезируется в одинаковых концентрациях у мужского и женского пола в глиальных клетках и нейронах центральной и периферической нервной системы. Его метаболиты связываются с теми же рецепторами, которые опосредуют эффекты противотревожных средств (бензодиазепиновых транквивлизаторов) – ГАМК-А/бензодиазепиновым рецепторным комплексом, и оказывают психотропное действие на организм женщины, что нашло свое место в лечении некоторых форм депрессии, агрессии, мигрени. Активация ГАМК-рецепторов ведет также к улучшению питания нервной ткани. Когда в конце месячного цикла резко снижается секреция прогестерона, ослабляется трофическая функция ЦНС, что проявляется в повышенной утомляемости, раздражительности, расстройствами настроения, среди которых преобладают чувство беспричинной тревоги. С резким падением продукции прогестерона по окончанию беременности связано и повышение частоты депрессивных состояний в послеродовом периоде. Производные прогестерона в гормональных контрацептивах оказывают гипнотический эффект, который используется для лечения предменструального синдрома и психологического стресса [32].
     Специфической общепризнанной поведенческой реакцией на стресс является груминг .По данному параметру можно оценить  нейрогуморальные изменения в организме. Анализируя характер влияния женских половых гормонов различного происхождения на груминговую активность крыс с исходно разным уровнем активности, выявлено, что естественный женский стероид эстрон стимулирует груминг у низкоактивных крыс и подавляет у средне- и высокоактивных животных. Синэстрол, напротив, не повлиял на груминговое поведение стрессированных крыс. Данный факт указывает на анксиогенное влияние эстрона на низкоактивных в контроле крыс и анксиолитическое – на средне- и высокоактивных стрессированных самцов белых крыс[37].
     Учитывая полученные данные, было сделано предположение, что изменения в эстральном цикле и половом поведении обусловлены с дисбалансом эстрогенов и гестогенов в крови связанным с дефицитом магния. В этой связи сочли целесообразным изучить и процессы зачатия у этих самок [29].

1.5 Поведенческие особенности  крыс линии WAG/Rij
     В настоящее время в практике поведения клинических исследований используются животные различных линий. Крысы нужны для установления токсичности лекарственных веществ и ядов, широко используются при изучении вопросов питания, проведения биологической стандартизации гормональных препаратов для постановки научных исследований по витаминологии, физиологии, фармакологии, эндокринологии, биохимии и для изучения процессов поведения и других вопросов психологии. Но следует знать поведенческие реакции крыс разных линий.
     WAG/Rij – инбредная линия крыс, выведенная из крыс Wistar Albino Glaxo в Великобритании (Wistar Albino Glaxo Laboratory, UK) в 1924г. Позднее эта линия крыс была ввезена в Нидерланды (REPGO Institute of TNO at Rijswijk, The Netherlands). WAG/Rij означает Wistar Albino Glaxo/Rijswijk (Саркисова К.Ю., 2005). Крысы линии WAG/Rij – результат скрещиваний более 130 поколений (Depaulis A., van Luijtelaar G., 2006).
     Известно, что у крыс линии WAG/Rij одним из патогенетических механизмов эпилептической активности является гипофункция дофаминергической системы мозга [50]. 
     Однако механизмы формирующегося снижения активности этой системы остаются нераскрытыми. Предполагается, что дефицит дофаминергической системы у крыс линии WAG/Rij может быть предопределен изменением функционирования дофаминовых рецепторов [50,53].
     Рецепторы D2 являются наиболее распространённым типом дофаминовых рецепторов. Они представлены в коре головного мозга, в среднем мозге, и особенно широко в лимбической системе. От режима функционирования данных рецепторов и уровней дофамина (ДА) зависит стратегия приспособительного поведения, которая может проявляться в двух формах - активной и пассивной [40].
     Таким образом, исследование тревожно-депрессивных состояний в зависимости от уровня  половых стероидов  при изучении эпилепсии и других патологий нервной системы является актуальным и имеет большое практическое значение. Однако эта область исследований мало изученная и требует детальное выяснение взаимосвязи поведения, эмоциональной реактивности и тревожности с уровнем стероидных гормонов в различных отделах мозга для понимания их нейроактивных и нейроэндокринных функций. 


     
     
     
     
     
     
     
     
     
     Глава 2. Материал и методы исследования
     2.1 Объекты  исследования
     Эксперименты проводились на крысах линии Wistar (n=20) и WАG/Rij (n=20), которые содержались в условиях вивария кафедры физиологии человека и зоологии Башкирского государственного университета, характеризующихся постоянством комнатной температуры (20-22 °C) и уровнем влажности. Животные находились в стандартных пластмассовых клетках по 3-4 особи. Условия содержания для всех крыс были одинаковыми. Клетки, кормушки, поилки и весь необходимый инвентарь систематически обрабатывались с использованием специальных дезинфицирующих средств. В качестве подстилки использовали опилки и мелкую стружку, которые менялись по мере загрязнения, но не реже 1 раза в неделю.  Питались в основном зерновой смесью, свежими овощами и творогом.  При работе с крысами полностью соблюдались международные принципы Хельсинкской декларации о гуманном отношении к животным (2000 год).
     2.2 Методы исследования
     2.2.1 Определение стадий эстрального цикла самок крыс методом влагалищных мазков
     Мазки из влагалища крыс можно брали  двумя способами: с помощью пипетки или  ватной палочки. Заранее следует заготовить достаточное количество палочек, так как каждую можно использовать только один раз. На рабочем столе должны находиться емкость с водой, нужное количество обезжиренных предметных стекол и восковой карандаш (маркер использовать не рекомендуется, так как при фиксации препарата надпись растворится). Обезжиривание обычно проводят длительным выдерживанием предметных стекол в растворе этанола с диметиловым эфиром в пропорции 1:1.
     Перед взятием мазка ватная палочка погружается в чашку с водой, и капля воды переносится на предметное стекло. Прикасаться пальцами к тампону нежелательно, так как клетки эпидермиса кожи пальцев, попав мазок, могут нарушить микроскопическую картину. После этого намоченный конец ватной палочки осторожно вводят во влагалище и слегка там поворачивают. Вынув его из влагалища, размазывают захваченную ватой пробу в капле воды, нанесенной на предметное стекло. На стекле подписывают дату взятия мазка и номер крысы.
     При систематическом взятии мазков у одних и тех же животных, предпочитают брать пробы глазной пипеткой, во избежание механического повреждения влагалища. Для этого набирается несколько капель воды в пипетку и, неглубоко вводя кончик во влагалище, 1-2 раза выжимают воду из пипетки и насасывают ее обратно. Взятая проба переносится на обезжиренное предметное стекло.
     В условиях длительного эксперимента забор влагалищных мазков необходимо проводить в фиксированное время суток [30].
     Неокрашенные пробы лучше рассматривать под микроскопом немедленно, так как по мере подсыхания изучение мазка становится более затруднительным. Считается, что более точно мазок распознается в фиксированном и окрашенном препарате [22].
     С целью определения  ритмичности функционирования яичников, ежедневно анализировали влагалищные мазки. По следующей методике проводили приготовление мазков и анализировали их. Влагалищные смывы брали тонкой глазной пипеткой, помещали на предметное стекло и рассматривали под микроскопом при увеличении в 300 раз в слегка затемненном поле [7]. Эстральный цикл крысы состоит из 4-х фаз: проэструс (предтечка), эструс (течка), метаэструс (послетечка) и диэструс (межтечка, или стадия покоя). Каждой стадии эстрального цикла соответствует определенный клеточный состав влагалищного мазка (табл.1).
     После определения фазы полового цикла каждого животного результаты были подвергнуты обработке и анализу.
     2.2.2  Тест «Открытое поле»
     Самые разные поведенческие тесты используются для изучения количественных и качественных индексов поведения  [22]. Одним из самых распространенных тестов, .......................