Определение остаточных количеств препарата Винцит в растении Тысячелистник обыкновенный

     Введение
     
     В настоящее время потребность человечества в лекарственных средствах постоянно растет. Среди огромного множества различных лекарственных средств большую долю составляют лекарственные препараты растительного происхождения. 
     Заготовка лекарственного растительного сырья производится как от дикорастущих, так и от культивируемых лекарственных растений. Преимущественно лекарственные растения культивируются, так как заготовка дикорастущих растений не дает должных объемов сырья для удовлетворения нужд фармацевтической промышленности. 
     Лекарственные растения, как и любые другие растения, подвержены порче различными вредителями. С целью защиты посевов от насекомых, бактерий, грибов, грызунов и других сельскохозяйственных вредителей используются различные агротехнические приемы, одним из которых является обработка растений пестицидами. Абсолютно все пестициды обладают токсическим действием и негативно влияют на живые организмы. Пестициды могут накапливаться в различных частях растения и после сбора и заготовки сырья могут попасть в лекарственные средства, а затем и в организм человека, тем самым вызвать отравления различной степени тяжести. 
     Чтобы предотвратить негативное влияние пестицидов на организм человека необходимо не только использовать наиболее безопасные пестициды, но и проводить контроль лекарственного растительного сырья на содержание пестицидов. Контроль качества сырья очень важен, так как даже если лекарственные растения не подвергались обработке, то в них все равно могут попасть пестициды. Особенно это важно в том случае если культивируемые или дикорастущие лекарственные растения произрастают по соседству с опрыскиваемыми полями. Все это определяет актуальность данной дипломной работы.
     
     Целью данной дипломной работы является определение остаточных количеств препарата Винцит в растении Тысячелистник обыкновенный.Задачи дипломной работы:
     1. Смоделировать ситуацию, при которой изучаемое растение подвергалось бы максимальной обработке в соответствии с нормами агротехники;
     2. Провести обработку семян Тысячелистника обыкновенного исследуемым препаратом в соответствии с методикой;
     3. Провести сев растения с учетом всех агротехнических особенностей;
     4. Регулярно проводить полив и прополку от сорняков экспериментальных участков;
     5. Провести отбор серии проб исследуемого растения;
     6. Найти наиболее подходящую методику качественного и количественного определения препарата в растении;
     7. Произвести качественное и количественное определение исследуемого препарата в пробах;
     8. Проанализировать полученные результаты и на их основании сделать выводы.
     

     Глава I. Теоретическая часть

1. Характеристика растения Тысячелистник обыкновенный

1.1. Ботаническое описание растения Тысячелистник обыкновенный

     Название растения: Тысячелистник обыкновенный (Achilleamillefoluim L.)
     Семейство: семейство Астровые (Asteraceae) или Сложноцветные (Asteraceae)
     Народные названия:кровавник, кровник, серпник, серпорез, белая кашка, гулявица, живучая трава
     
     Рис. 1 Тысячелистник обыкновенный
     Тысячелистник обыкновенный (Рис.1) - многолетнее травянистое растение. Корневище толстое, ползучее, разветвлённое, с многочисленными тонкими, мочковатыми корнями и подземными побегами.
     Стебли немногочисленные или одиночные, прямостоячие или приподнимающиеся, прямые, реже извилистые, округлые, высотой 20—80 (до 120) см, угловато-бороздчатые, голые или слегка опушённые, ветвящиеся лишь в верхней части.
     Пластинка листа длиной до 15 см, шириной 0,5—3 см с многочисленными масляными желёзками на нижней стороне. Листья очерёдные, в общем очертании ланцетовидные или линейно-ланцетовидные дважды или трижды не до самого основания перисто-рассечённые на тонкие сегменты, конечные дольки листьев ланцетно-яйцевидные, 0,3—2 мм шириной, быстро переходящие в шипик. Прикорневые листья развиваются от побегов на черешках, стеблевые — небольшие, опушённые, сидячие.
     Цветки мелкие белые или розовые, собраны в небольшие соцветия — корзинки, которые в свою очередь образуют общее щитковидное соцветие из многочисленных корзинок. В каждой корзинке краевые женские цветки язычковые, белые, реже розовые; обоеполые срединные — трубчатые, жёлтые. Обёртки 3—4,6 мм длиной, продолговатые, яйцевидные, тупые, гладкие или слегка опушённые, с перепончатым, нередко буроватым краем. Завязь нижняя, одногнёздная.
     Плод — плоская продолговатая серебристо-серая семянка без крыльев, длиной 1,5—2 мм.
     Места произрастания:Широко распространённый в Европе и Азии вид, занесён также и на другие континенты. В России встречается практически во всех регионах. Обычное растение во всех областях европейской части России, а также во многих районах Западной и Восточной Сибири, Дальнего Востока, Кавказа и Средней Азии.
     Тысячелистник обыкновенный растёт в лесной, лесостепной и степной зонах, на суходольных лесных лугах, в луговых степях, среди кустарников, в разреженных лесах, на опушках, межах, вдоль дорог, по оврагам, на залежах, пустырях, свалках, в посёлках, по берегам водоёмов, по окраинам полей.
       

1.2. Сбор и заготовка тысячелистника обыкновенного

     Лекарственными являются трава и цветки тысячелистника обыкновенного. Собирают их в период цветения в июне-июле. Внешние признаки сырья — цельные или частично измельченные цветоносные побеги. Стебли округлые, с очередными листьями, длиной до 15 см. Заготавливают траву, срезая серпами, ножами верхушки стеблей длиною до 15 см. Если заготавливают цветки, то щитки обрывают или срезают ножницами со стеблями не длиннее 2 см. При густых зарослях растения скашивают косами и выбирают траву руками. Сушат на открытом воздухе в тени или под навесами с хорошей вентиляцией, раскладывая тонким слоем, а также в сушилках при температуре не более 50 °С.
       

1.3. Химический состав тысячелистника обыкновенного

     Надземная часть в период цветения содержит флавоны, алкалоид ахиллеин, кумарины, аконитовую кислоту, горькие и дубильные вещества, смолы, органические кислоты, инулин, аспарагин, минеральные соли, аскорбиновую кислоту, филлохинон, каротин, холин. В семенах содержится до 21 % жирного масла. В листьях тысячелистника содержится алкалоид ахиллеин C7H13O3N  - 0,05%. Листья и соцветия содержат 0,8% эфирного масла желтовато-зелёного или синего цвета. В состав масла входят: до 25-30% проазулена, из которого получен хамазулен С14Н16, ?-пинен, ?-пинен, L-борнеол, сложные эфиры (10-13%), L-камфора, туйон, цинеол (8-10%), карцофиллен, муравьиная, уксусная и изовалериановая кислоты, спирты состава С10Н18O (20%); эфирного масла больше в цветах, чем в листьях. Кроме эфирного масла содержатся салициловая, муравьиная, уксусная и изовалериановая кислоты, витамин K.
       

1.4. Описание сырья тысячелистника обыкновенного

     Согласно требованиям Государственной фармакопеи (XI издание)Цельное сырье представлено цельными или частично измельченными цветоносными побегами. Стебли округлые, опушенные, с очередными листьями, длиной до 15 см. Листья длиной до 10 см, шириной до 3 см, продолговатые, дваждыперисторассеченные на ланцетные или линейные доли. Корзинки продолговато - яйцевидные, длиной 3-4 мм, шириной 1,5-3 мм, в щитковидных соцветиях или одиночные. Обвертки корзинок из черепитчатых продолговато - яйцевидных листочков с перепончатыми буроватыми краями. Цветоложе корзинок с пленчатыми прицветниками. Краевые цветки пестичные. Срединные цветки трубчатые обоеполые.
     Цвет стеблей и листьев серовато - зеленый, краевых цветков - белый, реже розовый, срединных - желтоватый. Запах слабый, ароматный. Вкус пряный, горьковатый.
     Числовые показатели  цельного сырья: эфирного масла не менее 0,1%; влажность не более 13%; золы общей не более 15%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 3%; пожелтевших, побуревших и почерневших частей травы не более 1%; стеблей толще 3 мм не более 3%; органической примеси не более 0,5%; минеральной примеси не более 1%.
     Измельченное сырье представлено кусочками корзинок, отдельных цветков, листьев, стеблей различной формы, проходящие сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет серовато - зеленый с беловато - желтоватыми вкраплениями. Запах слабый, ароматный. Вкус пряный, горьковатый.
     Числовые показатели измельченного сырья: эфирного масла не менее 0,1%; влажность не более 13%; золы общей не более 15%; золы, нерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, не более 3%; пожелтевших, побуревших и почерневших частей травы не более 1%; частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм, не более 10%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм, не более 10%; органической примеси не более 0,5%; минеральной примеси не более 1%.
       

1.5. Тысячелистник обыкновенный в медицине и фармации

     Препараты тысячелистника обыкновенного: порошок, таблетки, настой, отвар, жидкий экстракт, сборы, чаи.
     Порошок тысячелистника обыкновенного представляет собой мельчайший порошок травы растения. Назначают его по 0,3 г на приём 2–3 раза в день после еды.
     Таблетки тысячелистника обыкновенного готовят из мельчайшего порошка растения по 0,3 г. Принимают по 1 таблетке 2–3 раза в день после еды, запивая водой.
     Жидкий экстракт тысячелистника обыкновенногоготовят на 40% этиловом спирте методом перколяции. Назначают по 40–50 капель на приём.
     Отвар тысячелистника обыкновенного готовят следующим образом: трава растения (1 чайная ложка) заливается 250 мл кипятка, затем её кипятят 5–10 минут на слабом огне, отвар процеживают. Пьют в течение 25–30 дней 3 раза в день по ? стакана.
     Настой тысячелистника обыкновенного получают так: 20 г травы измельчают до величины частиц 0,5 мм, заливают 200 мл воды комнатной температуры, кипятят 15 минут под крышкой, настаивают в течение не менее 45 минут и процеживают. Настой тысячелистника может хранится в прохладном месте в течение 3–4 дней. Пьют 3–4 раза в день по 1 столовой ложке после еды.
     Фармакологическое действие: кровоостанавливающее, потогонное, противовоспалительное, усиливает желчеотделение.
     Применение: отвар и настой — при носовых и зубных кровотечениях, кровотечении из мелких ран, ссадин, царапин, при легочных и маточных кровотечениях, фибромиомах, воспалительных процессах, геморроидальных кровотечениях.Как кровоостанавливающее средство используются жидкий экстракт тысячелистника — 3 раза в день по 40–50 капель и настой травы тысячелистника (15:200)—по 1 столовой ложке 3 раза в день.Содержащийся в тысячелистнике обыкновенномахиллеин повышает свёртываемость крови.В гомеопатии тысячелистник — как средство при кровотечениях из кишечника и лёгких механического происхождения.При заболеваниях желудочно-кишечного тракта сопровождающихся болями, поносами и нарушениями пищеварения — колитах, гастритах, язвенной болезни; простудных заболеваниях дыхательных путей. Тысячелистник обыкновенный оказывает благотворное влияние на ЖКТ нормализуя секреторно-моторные процессы и успокаивая боли (после приёма препаратов тысячелистника боли проходят очень быстро, обычно через 15–25 минут после их приёма).При гастритах с пониженной кислотностью перед едой принимают по 3–4 столовые ложки свежеприготовленного настоя тысячелистника 10:200). Жидкий экстракт и настой тысячелистника— как горечи для улучшения аппетита. Сборы в составе корзинок тысячелистника, цветков боярышника, листьев и цветков мелиссы, цветков и травы пустырника - при стенокардии, неврозах сердца, истощении нервной системы, истерии.Цветки тысячелистника обыкновенного в виде отвара или в составе сборов— как тоническое средство.Сбор из смеси корзинок тысячелистника, травы мелиссы лекарственной, травы фиалки душистой в соотношении 1:2:2— при лечении энуреза (ночного недержания мочи).Берут 2 столовые ложки смеси на 2 стакана воды, кипятят на малом огне 5 минут, настаивают 1 час. Детям 2–4 лет рекомендуется принимать отвар по 1 столовой ложке 4 раза в сутки за 30 минут до еды, детям 6–12 лет — по 50–70 мл 4 раза в сутки.Препараты тысячелистника обыкновенного (сок и настой) используются как местные (наружные) средства компрессов, примочек, в виде ванн (чаще в смесях) для лечения заболеваний кожи: хронических дерматозах (псориаз, экзема, атопический дерматит, нейродермит, красный плоский лишай), свежих и гнойных язвах, гнойных ранах, фурункулах и других кожных заболеваниях.При высыпаниях на лице рекомендуется применять для мытья лица настой тысячелистника — кожа становится матовой, гладкой, высыпания исчезают.
     Противопоказания к применению препаратов тысячелистника обыкновенного: кожная сыпь, не только при использовании его в качестве наружного средства для ванн, примочек и компрессов, но и при простом прикосновении к растению. Если подобные высыпания появились при лечении тысячелистником, его нужно немедленно отменить.
     Беременность и лактация: беременность является противопоказанием к применению препаратов тысячелистника обыкновенного.
       

     2. Характеристика пестицидаВинцит
     2.1. Физико-химическая и токсикологическая характеристикавинцита
     Действующее вещество: Тиабендазол, Флутриафол
     Форма выпуска: Концентрат суспензии
     Содержание действующего вещества: 25 + 25 г/л
     Химическая формула: Тиабендазол ? С10Н7N3S (Рис. 2. Рис. 3); Флутриафол - C16H13F2N3O (Рис. 4. Рис. 5)
     
     Рис. 2 Трехмерная модель молекулытиабендазола
     
     Рис. 3 Структурная формулатиабендазола
     

     
     Рис. 4 Трехмерная модель молекулыфлутриафола
     
     Рис. 5 Структурная формулафлутриафола
     

     Синонимы тиабендазола: арбомект, мертект, биогурд, титусим, текто
     Синонимы флутриафола: ферракс, винцит, импакт
     Химический класс: Бензимидазолы + триазолы
     Способ проникновения: Контактный пестицид, системный пестицид
     Характер действия: Защитный пестицид, лечащий фунгицид
     Класс опасности для человека: 3(умеренно-опасен)
     Физико-химические свойстватиабендазола:
     Белое кристаллическое вещество без запаха. При подкислении растворимость в воде резко возрастает и при рН=2 составляет 10 г/л. Тиабендазол нелетучий. При температуре 310°С возгоняется без потери фунгицидных свойств, вследствие чего препараты на его основе используют в форме шашек при фумигации помещений до и после загрузки в них картофеля.
     Тиабендазол стабилен в водных, кислых и щелочных растворах, термостоек.
     Физические характеристики:
     Молекулярная масса 201,3;
     Температура плавления 296-304 °С;
     Растворимость в воде 30 мг/л;
     Давление паров при 25 °С: 4,6•10-4 мПа.
     Физико-химические свойствафлутриафола:
     Белое кристаллическое вещество, растворимо в ацетоне, этаноле, диметилсульфоксиде и дихлорметане, не растворимо в метаноле. Достаточно устойчиво.
     Физические характеристики:
     Молекулярная масса 301,3;
     Температура плавления 130 °C;
     Давление паров при 20 °С 400 нПа;
     Растворимость в воде 130 мг/л;
     Растворимость в воде при рН=7 – 0,013%.
       

     2.2. Применение препарата Винцит
     
     Винцит – надежный фунгицид для обработки семян широкого спектра культур на основе двух взаимодополняющих действующих веществ.
     Винцит применяется для уничтожения семенных патогенов: головни пыльной, каменной, ложной, твердой; стеблевой плесени, снежной спорыньи, корневой гнили, сетчатой пятнистости, пирикуляриоза, бурой ржавчины, плесневение семян
     Системный фунгицид флутриафол подавляет развитие ржавчины, мучнистой росы на винограде и зерновых культурах, церкоспороза сахарной свеклы, парши яблони. Слабо действует против церкоспореллеза и фузариоза. Имеет длительный защитный эффект до 8 недель и хорошее лечащее действие, обладает глубинным эффектом.В растениях передвигается акропетально. Период ожидания составляет 30 дней. Флутриафол блокирует биосинтез эргостерина, нарушая тем самым образование клеточной оболочки и развитие гиф мицелия. Обладает также фумигантным действием, особенно в отношении мучнисторосяных грибов.
     Контактно-системный фунгицидтиабендазол защитного и лечебного действия. Обладает широким спектром фунгицидного действия, особенно эффективен против кагатныхгнилей, болезней хранения.Тиабендазол защищает от болезней, образуя на их поверхности долго сохраняющийся защитный слой, действие сохраняется до шести месяцев.За счет своих метаболитов тиабендазол может ингибировать биосинтез нуклеиновых кислот ДНК и РНК, а также процессы дыхания.Вещество, взаимодействуя с белком микротрубочек, подавляет важную фазу деления ядра – формирование «веретена», или протоплазматических нитей. После 2-3 лет применения возможно появление высокорезистентных форм грибов и резкое снижение эффективности препарата.
     Преимущества препаратаВинцит:
     * Широкий спектр зарегистрированных культур.
     * Синергизм двух взаимодополняющих действующих веществ с различными механизмами действия обеспечивает надежную защиту против внутренней и поверхностной семенной инфекции, почвенных патогенов, заболеваний, передающихся аэрогенным путем в начальные фазы вегетации.
     * Высокоэффективен против наиболее трудно контролируемых болезней – фузариозная и гельминтоспориозная корневые гнили, снежная плесень, септориоз.
     * Быстрое лечебное и длительное профилактическое действие, благодаря высокой скорости проникновения и перемещения в растущие ткани.
     

     2.3. Получение препарата Винцит
     

     2.4. Токсикологические свойства и характеристики препарата Винцит
     
     Тиабендазол:
     Стабилен в биологических средах.
     Полезные виды. Практически не токсичен для пчел и других насекомых. Умеренно токсичен для рыб.
     Теплокровные. Малотоксичен для теплокровных.ЛД50 для крыс 3330 мг/кг, для мышей 3810 мг/кг. Не раздражает кожу, не обладает тератогенным и канцерогенным действием. На животных и человека оказывает антигельминтное действие.
     Флитриафол:
     Полезные виды. Из-за длительной сохранности в воде и токсичности для организмов флутриафолопасен для водных организмов. Умеренно опасен для пчел.Малотоксичен для птиц, рыб. Не опасен для дождевых червей и почвенных микроорганизмов: даже при повышенной норме расхода (1 кг д.в./га) не влиял отрицательно на численность, массу и видовой состав дождевых червей, а также на микробиологические процессы в почве.
     Теплокровные. Относится к третьему классу опасности для человека; особенно опасен при поступлении через дыхательные пути, может вызвать раздражение кожи. ЛД50 для крыс – 1480 мг/кг.[2][6] Раздражает слизистые оболочки глаз. Кожно-резорбтивная доза для крыс более 1г/кг.
     При 90-дневном скармливании с пищей в дозах 20 и 5 мг/кг корма не вызывал отрицательных явлений, соответственно, у крыс и кроликов.
     В почве. Период полураспада в почве составляет ДТ50 = 65-125 дней.
       

2. Характеристика метода высокоэффективной жидкостной хроматографии(ВЭЖХ)

     3.1 Теоретические основы метода ВЭЖХ
     
     Высокоэффективная жидкостная хроматография (ВЭЖХ) - один из эффективных методов анализа и разделения сложных примесей. Она как метод была открыта в 1903 году русским ученым М.С. Цветом, который он использовал для разделения растительных пигментов на их составление колонки, заполненные порошком мела. При вымывании пигментов петролейным эфиром они перемещались вдоль колонки, разделяясь при этом на кольца разного цвета. В высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) характер происходящих процессов в хроматографической колонке, в общем идентичен с процессами в газовой хроматографии. Отличие состоит лишь в применении в качестве неподвижной фазы жидкости. В связи с высокой плотностью жидких подвижных фаз и большим сопротивлением колонок газовая и жидкостная хроматография сильно различаются по аппаратурному оформлению. В ВЭЖХ в качестве подвижных фаз обычно используют чистые растворители или их смеси.
     Отличительной особенностью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) является использование сорбентов с размером зерен 3—10 мкм, что обеспечивает быстрый массоперенос при очень высокой эффективности разделения.
      В настоящее время ВЭЖХ по темпам развития вышла на первое место среди инструментальных методов, обогнав даже газовую хроматографию. Важнейшее преимущество ВЭЖХ по сравнению с газовой хроматографией — возможность исследования практически любых объектов без каких-либо ограничений по их физико-химическим свойствам, например, по температурам кипения или молекулярной массе.
     Сегодня ВЭЖХ представляет собой хорошо оформленный инструментальный метод, который широко применяют в различных областях науки и техники.  Особенно    велико его значение в таких важнейших областях, как биохимия, молекулярная биология, контроль загрязнений    окружающей    среды,а также в химической, нефтехимической, пищевой и фармацевтической промышленности.
     Преимущества метода ВЭЖХ:
* большой диапазон молекулярных масс веществ, с которыми можно работать,
* мягкость условий,
* высокая эффективность разделения (до 150000 т.т. на 1 м),
* высокая скорость анализа,
* количественная точность,
* высокая чувствительность.


3.2 Классификация методов ВЭЖХ по механизму разделению

Большинство проводимых методом ВЭЖХ разделений основано на смешанном механизме взаимодействия веществ с сорбентом, обеспечивающим большее или меньшее удерживание компонентов в колонке. Механизмы разделения в более или мeнee чистом виде на практике встречаются достаточно редко, например, адсорбционный при использовании абсолютно безводного силикагеля и безводного гексана для разделения ароматических углеводородов. При смешанном механизме удерживания для веществ разного строения и молекулярной массы можно оценить вклад в удерживание адсорбционного, распределительного, эксклюзионного и других механизмов. Однако для лучшего понимания и представления о механизмах разделения в ВЭЖХ целесообразно рассматривать разделения с преобладанием того или иного механизма как относящиеся к определенному виду хроматографии, например, к ионообменной хроматографии.

Адсорбционная хроматография

     Разделение методом адсорбционной хроматографии осуществляется в результате взаимодействия вещества с адсорбентами, такими, как силикагель или оксид алюминия, имеющими на по­верхности активные центры. Различие в способности к взаимодействию с адсорбционными центрами разных молекул пробы приводит к их разделению на зоны в процессе движения с подвижной фазой по колонке. Достигаемое при этом разделение зон компонентов зависит от взаимодействия как с растворителем, так и с адсорбентом.
     В основе сорбции на поверхности адсорбента, имеющего гидроксильные группы, лежит специфическое взаимодействие между полярной поверхностью адсорбента и полярными (или способным поляризоваться) группами или участками молекул. К таким взаимодействиям относят диполь-дипольное взаимодействие между постоянными или индуцированными диполями, образование водородной связи вплоть до образования комплексов или комплексов с переносом заряда. Возможным и достаточно частым в практической работе является проявление хемосорбции, которая может привести к значительному повышению времени удерживания, резкому снижению эффективности, появ­лению продуктов разложения или необратимой сорбции вещества.  Изотермы адсорбции веществ имеют линейную, выпуклую или вогнутую форму. При линейной изотерме адсорбции пик вещества симметричен и время удерживания не зависит от размера пробы. Чаще всего изотермы адсорбции веществ нелинейны и имеют выпуклую форму, что приводит к некоторой асиммет­рии пика с образованием хвоста.
     Наибольшее применение в ВЭЖХ находят адсорбенты из силикагеля с разным объемом пор, поверхностью, диаметром пор. Значительно реже используют оксид алюминия и крайне редко - другие адсорбенты, широко применяющиеся в класси­ческой колоночной и тонкослойной хроматографии. Основная причина этого - недостаточная механическая прочность большинства прочих адсорбентов, не позволяющая упаковывать их я использовать при повышенных давлениях, характерных для ВЭЖХ.
Полярные группы, обусловливающие адсорбцию и находящиеся на поверхности силикагеля и оксида алюминия, по свой­ствам близки. Поэтому обычно порядок элюирования смесей веществ и элюотропный ряд растворителей для них одинаковы. Однако различие химического строения силикагеля и оксида алюминия иногда приводит к появлению различий в селективности - тогда предпочтение отдают тому или другому адсор­бенту, более подходящему для данной конкретной задачи. На­пример, оксид алюминия обеспечивает большую избирательность при разделении некоторых многоядерных ароматических углеводородов. 
Предпочтение, отдаваемое обычно силикагелю по сравнению с оксидом алюминия, объясняется более широким выбором силикагелей по пористости, поверхности и диаметру пор, а также значительно более высокой каталитической активностью оксида алюминия, нередко приводящей к искажению результатов анализа вследствие разложения компонентов пробы, либо их необратимой хемосорбции.
Недостатки адсорбционно хроматографии:
* большая длительность процессов уравно­вешивания адсорбентов с растворителями, содержащими воду в микроколичествах
* трудность приготовления раствори­телей с определенной и воспроизводимой влажностью
* плохаявоспроизводимость параметров удерживания, разрешения, селективности
* невозможное использование градиентного элюирования - возврат к исходному состоянию настолько длителен, что значительно превосходит выигрыш времени за счет использования градиента
* необратимосорбирующиеся вещества, накапливаясь на начальном участке колонки, меняют природу сорбента, могут привести к повышению сопротивления колонки или даже к полной ее забивке

Распределительная хроматография

Распределительная хроматография — это вариант ВЭЖХ, в котором разделение смеси на компоненты осуществляется за счет различия их коэффициентов распределения между двумя несмешивающимися фазами: растворителем (подвижная фаза) и фазой на сорбенте (неподвижная фаза).Исторически пер­выми были сорбенты такого типа, которые получали нанесением жидких фаз (оксидипропионитрила, парафинового масла и др.) на пористые носители, аналогично тому, как готовили и готовят сорбенты для газожидкостной хроматографии (ГЖХ). Однако сразу же обнаружились и недостатки таких сорбентов, основ­ным из которых было относительно быстрое смывание фазы с носителя. За счет этого количество фазы в колонке постепенно уменьшалось, времена удерживания также уменьшались, на на­чальном участке колонки появлялись не покрытые фазой центры адсорбции, вызывавшие образование хвостов пиков. С этим недостатком боролись, насыщая растворитель нанесен­ной фазой еще до его попадания в колонку. Унос также умень­шался, когда использовали более вязкие и менее растворимые полимерные фазы, однако в этом случае из-за затруднения диффузии из толстых полимерных пленок эффективность колонок заметно снижалась.
Логическим оказалось привить химическими связями жид­кую фазу к носителю таким образом, чтобы унос ее стал физи­чески невозможен, т. е. превратить носитель и фазу в одно це­лое— в так называемый привито-фазный сорбент.
Первые привито-фазные сорбенты были получены замеще­нием силанольных групп, находящихся на поверхности силика-геля, в результате их реакции со спиртами или аминами. При этом отщеплялась вода, а остатки спиртов или аминов химиче­ски прививались к поверхности силикагеля. Эти так называе­мые «щеточные» сорбенты показали, что с их использованием действительно удается получить высокую эффективность коло­нок при отсутствии уноса фазы из колонки и стабильности вре­мен удерживания. Однако устойчивость таких сорбентов в ус­ловиях применения водных растворителей и даже слабооснов­ных или кислых сред была низкой: фаза отщеплялась химиче­ски за счет реакции гидролиза.
В дальнейшем усилия исследователей были направлены на поиск реагентов, прививка которых протекала бы достаточно быстро и полно, а образовавшиеся связи были максимально устойчивыми. Такими реагентами стали алкилхлорсиланы и их производные, позволившие по сходной технологии получать привито-фазные сорбенты разного типа и с разными как по­лярными, так   и неполярными группами на поверхности.

Успешное применение сорбентов последнего типа для ВЭЖХ способствовало росту их производства самыми разными произ­водителями. Каждая фирма производила такие сорбенты, как правило, на основе своего вида силикагеля и по своей техноло­гии, которая обычно составляет «ноу-хау» производства. В ре­зультате большое количество сорбентов, называющихся хими­чески совершенно одинаково (например, силикагель с привитым октадецилсиланом), имеют очень сильно различающиеся хро-матографические характеристики. Это связано с тем, что сили­кагель может иметь поры шире или уже, разную поверхность, пористость, его поверхность до прививки может гидроксилиро-ваться или нет, прививаться могут моно-, ди- или трихлорсила-ны, условия прививки могут давать мономерный, полимерный или смешанный слой фазы, используются разные методы удале­ния остатков реагентов, может использоваться или не исполь­зоваться дополнительная дезактивация силанольных и других активных групп. 
Сложность технологии прививки реагентов и подготовки сырья и материалов, ее многостадийность приводят к тому, что даже полученные по одной технологии ка одной фирме-произво­дителе партии сорбентов могут иметь несколько разные хрома-тографические характеристики. Особенно это касается тех слу­чаев, когда такие сорбенты используют для анализа многоком­понентных смесей, содержащих вещества, заметно различающиеся по количеству и положению функциональных групп, по роду функциональности.Учитывая вышеуказанное, всегда следует стремиться к тому, чтобы при использовании описанной в литературе методи­ки анализа применять именно тот самый сорбент и те же усло­вия работы. В этом случае вероятность того, что работу не удастся воспроизвести, является минимальной. Если же такой возможности нет, а берется сорбент другой фирмы с аналогичной привитой фазой, нужно быть готовым к тому, что потребу­ется длительная работа по переделке методики. При этом су­ществует вероятность (и ее следует учитывать), что на этом сорбенте даже и после длительной разработки можно не до­биться требуемого разделения. Наличие в литературе многих описанных методик разделения на давно производимых старых сорбентах стимулирует их дальнейшее производство и примене­ние по этой причине. Однако в тех случаях, когда приходится переходить к разработке оригинальных методик, особенно при­менительно к веществам, склонным к разложению, хемосорбции, перегруппировкам, целесообразно начинать работу на сор­бентах, разработанных в последнее время и выпускаемых по> новым, улучшенным вариантам технологии. Новые сорбенты имеют более однородный фракционный состав, более однород­ное и полное покрытие поверхности привитой фазой, более со­вершенные окончательные стадии обработки сорбентов.

Ионообменная хроматография

В ионообменной хроматографии разделение компонентов смеси достигается за счет обратимого взаимодействия ионизи­рующихся веществ с ионными группами сорбента. Сохранение электронейтральности сорбента обеспечивается наличием спо­собных к ионному обмену противоионов, расположенных в не­посредственной близости к поверхности. Ион введенного образ­ца, взаимодействуя с фиксированным зарядом сорбента, обме­нивается с противоионом. Вещества, имеющие разное сродство ' к фиксированным зарядам, разделяются на анионитах или на катеонитах. Аниониты имеют на поверхности положительно за­ряженные группы и сорбируют из подвижной фазы анионы. Ка-тиониты соответственно содержат группы с -отрицательным за­рядом, взаимодействующие с катионами.
В качестве подвижной фазы используют водные растворы ' солей кислот, оснований и растворители типа жидкого аммиа­ка, т. е. системы растворителей, имеющих высокое значение ди­электрической проницаемости е и большую тенденцию ионизи­ровать соединения. Обычно работают с буферными растворами, позволяющими регулировать значение рН.
При хроматографичеоком разделении ионы анализируемого вещества конкурируют с ионами, содержащимися в элюенте, стремясь вступить во взаимодействие с противоположно заря­женными группами сорбента. Отсюда следует, что ионообмен­ную хроматографию можно применять для разделения любых соединений, которые могут быть каким-либо образом  ионизированы. 
Ионообменная хроматография незаменима при разделении вы­сокополярных веществ, которые без перевода в производные не могут быть проанализированы методом ГЖХ. К таким со­единениям относятся аминокислоты, пептиды, сахара.
Ионообменную хроматографию широко применяют в медици­не, биологии, биохимии, для контроля окружающей среды, при анализе содержания лекарств и их метаболитов в крови и моче, ядохимикатов в пищевом сырье, а также для раз­деления неорганических соединений, в том числе радиоизотопов, лантаноидов, актиноидов и др. Анализ биополимеров (белков, нуклеиновых кислот и др.), на который обычно затрачивали часы или дни, с помощью ионообменной хроматографии прово­дят за 20—40 мин с лучшим разделением. Применение ионооб­менной хроматографии в биологии позволило наблюдать за об­разцами непосредственно в биосредах, уменьшая возможность перегруппировки или изомеризации, что может привести к не­правильной интерпретации конечного результата. Интересно ис­пользование данного метода для контроля изменений, происхо­дящих с биологическими жидкостями. Применение пори­стых слабых анионообменников на силикагелевой основе позво­лило разделить пептиды.
Естественно, что ионы образца, слабо взаимодействующие с ионообменником, при этой конкуренции будут слабо удержи­ваться на колонке и первыми вымываются с нее и, наоборот, более сильно удерживаемые ионы будут элюировать из колонки последними. Обычно возникают BTqpH4Hbie взаимодействия не­ионной природы за счет адсорбции или водородных связей об­разца с неионной частью матрицы или за счет ограниченной растворимости образца в подвижной фазе. Трудно выделить «классическую» ионообменную хроматографию в «чистом» ви­де, и поэтому некоторые хроматографисты исходят из эмпири­ческих, а не теоретических закономерностей при ионообменной хроматографии. 
Разделение конкретных веществ зависит в первую очередь от выбора наиболее подходящего сорбента и подвижной фазы. В качестве неподвижных фаз в ионообменной хроматографии применяют ионообменные смолы и силикагели с привитыми ионогенными группами.

Эксклюзионная хроматография

Эксклюзионная хроматография представляет собой вариант жидкостной хроматографии, в котором разделение происходит за счет распределения молекул между растворителем, находя­щимся внутри пор сорбента, и растворителем,    протекающим ' между его частицами. В отличие от остальных вариантов    ВЭЖХ, где разделение идет за счет различного взаимодействия компонентов с поверхностью сорбента, роль твердого наполнителя   в эксклюзионной хроматографии заключается только в формировании пор определенного размера, а неподвижной фазой являе.......................