VIP STUDY сегодня – это учебный центр, репетиторы которого проводят консультации по написанию самостоятельных работ, таких как:
  • Дипломы
  • Курсовые
  • Рефераты
  • Отчеты по практике
  • Диссертации
Узнать цену

Мессенджерные функции H2S при гипергомоцистеинемии и на фоне травмы

Внимание: Акция! Курсовая работа, Реферат или Отчет по практике за 10 рублей!
Только в текущем месяце у Вас есть шанс получить курсовую работу, реферат или отчет по практике за 10 рублей по вашим требованиям и методичке!
Все, что необходимо - это закрепить заявку (внести аванс) за консультацию по написанию предстоящей дипломной работе, ВКР или магистерской диссертации.
Нет ничего страшного, если дипломная работа, магистерская диссертация или диплом ВКР будет защищаться не в этом году.
Вы можете оформить заявку в рамках акции уже сегодня и как только получите задание на дипломную работу, сообщить нам об этом. Оплаченная сумма будет заморожена на необходимый вам период.
В бланке заказа в поле "Дополнительная информация" следует указать "Курсовая, реферат или отчет за 10 рублей"
Не упустите шанс сэкономить несколько тысяч рублей!
Подробности у специалистов нашей компании.
Код работы: K015813
Тема: Мессенджерные функции H2S при гипергомоцистеинемии и на фоне травмы
Содержание
МИНОБРНАУКИ РОССИИ
Федеральное государственное автономное образовательное
учреждение высшего образования
«ЮЖНЫЙ ФЕДЕРАЛЬНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»

Академия биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского
Кафедра биохимии и микробиологии





Ткаченко Марины Дмитриевны



МЕССЕНДЖЕРНЫЕ ФУНКЦИИ H2S ПРИ

ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИИ НА ФОНЕ ТРАВМЫ





ВЫПУСКНАЯ КВАЛИФИКАЦИОННАЯ РАБОТА

по направлению 06.03.01 – Биология





Научный руководитель –

Доцент кафедры биохимии и микробиологии

Академии биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского, к.б.н.

Вечканов Евгений Михайлович





Рецензент

Старший научный сотрудник НИЛ «Биомедицина»

Академии биологии и биотехнологии им. Д.И. Ивановского, к.б.н

Покудина Инна Олеговна






Ростов-на-Дону – 2018

РЕФЕРАТ

     ТЕМА: «Мессенджерные функции H2S при гипергомоцистеинемии и на фоне травмы». Объем работы: 61 страница компьютерного набора; 15 рисунков; 6 таблиц. Список литературы составил 81 наименование.

ГОМОЦИСТЕИН,	ГИПЕРГОМОЦИСТЕИНЕМИЯ,

СЕРОВОДОРОД, ОКИСЛИТЕЛЬНЫЙ СТРЕСС, ТРОМБОЗ, ЭНДОТЕЛИЙ.

     Объект исследования: плазма крови крыс при травме опорно-двигательного аппарата в условиях гипергомоцистеинемии.

     Цель исследования: изучение роли H2S в регуляции гомеостаза у крыс при травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

Результаты исследования:

1. Тридцатидневное  применение  метиониновой  диеты  у  крыс  без

травматического воздействия, так и на фоне травмы характеризовалось развитием средней ГГЦ и выражалось в приросте концентрации ГЦ в плазма крови крыс.

2. Интенсивность спонтанной светимости плазмы крови у группы животных, находившихся в условиях травмы на 14-е сутки и метиониновой диеты в сочетании с травмой на 14-е сутки резко возрастало по отношению к контрольным значениям и превышало контрольные значения на 32,5 и 27,7% соответственно.

3. У животных 5-ой, 7-ой и 8-ой группы происходило достоверное увеличение концентрации сероводорода в плазме крови на 30%, 12% и 25% соответственно по сравнению с контрольной группой.

4. У всех групп животных с травмой опорно-двигательного аппарата (6-я, 7-я, 8-я группы) на фоне ГГЦ также наблюдается достоверное превышение уровня битирозиновых сшивок на 149%, 109% и 161% соответственно относительно контроля.


2

ОГЛАВЛЕНИЕ

РЕФЕРАТ	2
СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ	4

ВВЕДЕНИЕ	6
1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ	8
1.1 Общая характеристика сероводорода	8
1.2 Свободнорадикальные процессы и их связь с H2S	9
1.3 Пути продукции и метаболизма сероводорода	11
1.4 H2S как трансмиттер сигнала на уровне клетки	13
1.5 Гипергомоцистеинемия	18

1.6 Патологические процессы при гипергомоцистеинемии.	23
1.7 Окислительные модификации белков при оксидативном стрессе:
изменение содержания SH-групп и образование битирозиновых сшивок	27
2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ	32
2.1 Модель травмы опорно-двигательного аппарата.	32
2.2 Моделирование гипергомоцистеинемии.	33

2.3 Дизайн эксперимента	33
2.4 Определение содержания гомоцистеина	35
2.5 Определение интенсивности свободнорадикальных процессов методом
люминол-H2O2-хемилюминесценции	35
2.6 Определение содержания H2S и сульфидов в плазме крови

фотометрическим методом с N,N-диметил-пара- фенилендиамином	39
2.7 Определение сульфгидрильных групп в белках колориметрическим

методом при помощи 5,5	-дитиобис(2-нитробензойной) кислоты (ДТНБК)	39
2.8 Определение образования битирозина в белках	40
2.9 Определение содержания белка по Брэдфорду	41
2.10 Статистическая обработка данных	42
3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ	43
3.1 Изменение уровня гомоцистеина в плазме крови	43
3.2 Изменение уровня H2S в плазме крови	45
3.3 Особенности протекания свободнорадикальных процессов в плазме
крови	46
3.4 Изменение уровня SH-групп в плазме крови	48
3.5 Изменение уровня битирозиновых сшивок в белках плазмы крови крыс	49
3.6 Обсуждение результатов	50

ВЫВОДЫ	53
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ	54













3

СОКРАЩЕНИЯ И ОБОЗНАЧЕНИЯ

АКР – активные кислородные радикалы

АФК – активные формы кислорода

ГГЦ – гипергомоцистеинемия

ГМК – гладкомышечные клетки

ГПО – глутатионпероксидаза

ГС – глутатионсинтетаза

ГЦ – гомоцистеин

ГЦК – гомоцистеиновая кислота ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ЛПНП – липопротеиды низкой плотности МТГФР – метилентетрагидрофолат-редуктаза нуклеарный фактор-?? (NF-??)

ПНЖК – полиненасыщенные цепи жирных кислот ПОЛ - перекисное окисление липидов СН2ТГФ – метилентетрагидрофолат СН3-ТГФ – 5-метилентетрагидрофолат СОД — супероксиддисмутаза Тк А2 – тромбоксан А2


УФ - освещение – ультрафиолетовое освещение

ФIа -ФXIIIа – активированные факторы свертывания крови ФI-ФXIII – факторы свертывания крови ЭК - эндотелиальные клетки

ЭТ-1- эндотелин 1

5-МТГФР – 5-метилентетрагидрофолат-редуктаза

Ala – аланин

СО2 – диоксид углерода

Cys – цистеин

Glu – глютамин

GSH - восстановленный глутатион

Н2О2 – пероксид водорода

4

Met – метионин

NF-?? - нуклеарный фактор–??

NMDA-типа

NO – оксид азота

ООNO - пероксинитрит

ОС – оксидативный стресс

PGI2 – простациклин

Ser – серин

Val – валин





















































5

ВВЕДЕНИЕ

В течение многих десятилетий сероводород (H2S) описывался как

токсичный газ, оказывающий повреждающее действие на организм человека. Недавно было обнаружено, что H2S эндогенно синтезируются и является сигнальной молекулой, выполняющей как аутокринную, так и паракринную регуляцию во многих системах организма. Вследствие интенсивной вовлечённости сероводорода в сигнальные пути передачи сигнала между клетками и системами органов, является очевидным, что нарушения в метаболизме сероводорода, наряду с нарушением синтеза и деградации гомоцистеина, в ряде случаев играет существенную роль в дисфункции эндотелия и является неотъемлемой составляющей патогенеза артериальной гипертензии (АГ), атеросклероза, ишемической болезни сердца (ИБС), хронической сердечной недостаточности (ХСН), и тромботических осложнений.

     Тромбоэмболические осложнения часто развиваются у больных после оперативных вмешательств, травм, больных с различными формами злокачественных новообразований. Возникновение тромбоза затрудняет дальнейшее лечение больного. Травма и оперативное вмешательство приводит к сдвигу системы гомеостаза в сторону гиперкоагуляции, что увеличивает вероятность тромботических осложнений. В то же время особенности функционирования системы гомоцистеин - сероводород, в частности, при травматическом воздействии или при развитии травматической болезни, не освещены в полном объеме. Значение этих особенностей позволит клиницистам предвидеть и вовремя корректировать возможные тромбооклюзивные осложнения.

     В связи с этим, целью нашей работы явилось изучение роли системы гомоцистеин – H2S в регуляции гомеостаза у лабораторных животных

(крыс) при травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

Для	достижения	данной	цели	были	сформулированы	и	решены

6

следующие задачи:

1. Определение уровня содержания гомоцистеина в плазме крови белых крыс при физиологической норме, травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

2. Определение интенсивности свободнорадикальных процессов в плазме крови белых крыс при физиологической норме, травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

3. Определение уровня содержания H2S в плазме крови белых крыс при физиологической норме, травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

4. Определение уровня содержания сульфгидрильных групп в белках плазмы крови белых крыс при физиологической норме, травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.

5. Определение уровня содержания битирозиновых сшивок в белках плазмы крови белых крыс при физиологической норме, травме опорно-двигательного аппарата, а также в ходе индуцированной гипергомоцистеинемии и её сочетании с травмой.























7

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Общая характеристика сероводорода

     Непосредственные исследования биологического действия сероводорода начались на рубеже XX в., но посвящены они были преимущественно изучению токсических свойств сероводорода (Fiorucci, 2006), токсичность которого в 5 раз выше, чем у угарного газа (СО). Рассматривать сероводород в качестве сигнальной молекулы, которая не только является токсическим агентом, но и участвует в регуляции функциональной активности различных клеток животного организма, стали только в конце XX в. Начало исследованиям в этой области положили японские исследователи K. Abe и H. Kimura, которые в 1996 г. впервые описали возможность синтеза сероводорода в тканях головного мозга и указали на его способность регулировать функции клеток (Abe, 1996).

     Хотя сероводород был обнаружен в тканях головного мозга еще в 1980-х гг., первоначально считался артефактом, который был сформирован из-за быстрого повышения концентрации сульфидов в тканях после смерти. Появление сероводорода связывали с его высвобождением из дисульфидных соединений серы (так называемых sulfane sulfur) во время препарирования тканей (Kimura, 2004). В настоящее время сероводород, как и NO и СО, отнесен к группе так называемых газотрансмиттеров – газообразных внутриклеточных сигнальных молекул, которые выполняют в клетке специфические регуляторные функции. H2S хорошо растворяется в липофильных веществах (Wang, 2004). Его растворимость в липидах в 5 раз превосходит растворимость в воде, что обуславливает хорошую проникающую способность H2S через мембранные структуры клетки и не требует участия специальных ионтранспортных систем. Константа проницаемости (РМ) сероводорода через бислойные липидные мембраны достаточно высока, что позволяет считать сероводород высокодоступной молекулой, эффективно осуществляющей свои функции внутри клеток. В организме человека и животных высокие концентрации сероводорода

8

присутствуют в кишечнике благодаря бактериям, утилизирующим сульфаты и серосодержащие аминокислоты (цистеин, метионин), а также серосодержащие вещества, полисахариды и липиды (Li, 2008). Физиологические концентрации сероводорода варьируют в различных органах и составляют 1–100 нмоль/г ткани (Reiffenstein, Hulbert, 1992). При высокой концентрации (более 1,0 мг/л) однократное вдыхание H2S может вызвать мгновенную смерть (Fiorucci, 2006).


1.2 Свободнорадикальные процессы и их связь с H2S

     В организме H2S стимулирует антиоксидантную систему наряду с известными антиоксидантами (в т.ч. с N-ацетилцистеином, глутатионом и супероксиддисмутазой) и оказывает цитопротекторное действие

(Whiteman, 2004).

      Угнетение эндогенного синтеза H2S увеличивает цитотоксическое воздействие на клетки организма экзогенного H2S.

      Установлено, что эндогенный H2S необходим для защиты почек от травм и дисфункций при ишемии/реперфузии, а введение NaHS уменьшает степень возникновения дизрегуляций и морфологических изменений почек (Tripatara, 2008). В то же время высокие миллимолярные концентрации H2S оказывают цитотоксическое действие на клетки, приводя к активации свободнорадикальных процессов, мобилизации кальция, истощению глутатиона, внутриклеточному высвобождению железа, а также индукции путей митохондриальной клеточной гибели.

В центральной  нервной  системе  (ЦНС)  H2S  связан  с  различными

физиологическими процессами, включая нейропротекцию и нейротрансмиссию. H2S защищает нейроны от апоптоза и дегенерации,

оказывая противовоспалительное действие и активирует антиоксидантные ферменты. H2S защищает нейроны от окислительного стресса за счет снижения уровня активных форм кислорода (АФК) и агрегации продуктов перекисного окисления липидов. Кроме того, сероводород ингибирует биологическую активность пероксинитритов (ONOO-), образующихся в
9

реакции оксида азота (NO) с супероксидным анионом. H2S выступает как антиоксидант путем прямого удаления АФК и путем восстановления глутатиона дисульфида.

     Существуют две формы глутаматной нейротоксичности – одна связана с гиперактивацией НМДА- рецепторов, а вторая – с подавлением цистеин/ глутаматного антипорта.

     Исследование механизмов действия H2S показало, что эффект газа не связан с его восстанавливающим действием на субъединицы НМДА-рецепторов. В исследованиях было показано, что донор H2S оказывал стимулирующие действие на НМДА-рецепторы, экспрессированные в мембране ооцитов, в нейронах гиппокампа и глии. С помощью иммуногистохимического анализа в первичных культурах нейронов и глии было показано, что H2S в микромолярных концентрациях вызывал увеличение уровня цАМФ. Поскольку известно, что активация протеинкиназы А усиливает активность НМДА-рецепторов, было сделано заключение, что H2S регулирует активность НМДА- рецепторов посредством увеличения внутриклеточного содержания цАМФ, который, в свою очередь приводит к фосфорилированию NR1, NR2A и NR2B субъединиц НМДА-рецептора, усиливающему ток через глутаматные каналы (Abe, Kimura 1996).

     Также было установлено, что H2S способен активировать цистеин/глутаматный антипорт и цистеиновый транспортер, что сопровождается увеличением внутриклеточной концентрации цистеина и продукции глутатиона.

      Поскольку цистеин преобразован в цистин в клетках для производства глутатиона, сокращение цистина вызывает сокращение производства глутатиона. В первичной культуре кортикальных астроцитов, H2S предотвращал H2О2 – вызванное повреждение клеток путем уменьшения внеклеточной концентрации глутамата, что приводило к усилению поглощения цистеина и продукции глутатиона (Lee,2009).

10

1.3 Пути продукции и метаболизма сероводорода

     Различают ферментативный и неферментативный пути синтеза сероводорода в организме. Ферментативный синтез сероводорода в клетках возможен благодаря работе специальных ферментов.

     Внутриклеточный синтез сероводорода осуществляется в различных клетках животного организма. Ниже на рисунке 1.1 представлена схема синтеза сероводорода в животных клетках (Ling et all., 2011).

2

Рисунок 1.1 - Биосинтез и деградация сероводорода в животных тканях млекопитающих (Ling et all., 2011)

      В настоящее время известно 3 фермента, в результате работы которых синтезируется сероводород:

1. цистотионин-?-синтаза (CBS);

2. цистотионин-?-лиаза (CSE);

3. 3-меркаптопируват-сульфуртрансфераза (3MST).

При этом CBS осуществляет синтез сероводорода преимущественно

в нервных  клетках.  В  гладкомышечных  клетках  кровеносных  сосудов,

сокращение	и	расслабление	которых	обеспечивает	изменение	тонуса


11

последних, синтез сероводорода осуществляет фермент CSE (Lowicka, Beltowski, 2007; Wagner, 2009), а в эндотелиальных клетках, выстилающих изнутри просвет сосуда - 3MST (Kamoun, 2004; Stipanuk, 1982). Все три фермента используют в качестве субстрата для синтеза сероводорода серосодержащую аминокислоту L-цистеин, которая катализирует реакцию его десульфгидратации: происходит отщепление от цистеина атома серы без последующего его окисления, что ведет к образованию H2S.

      Под действием CSE происходит преобразование цистина (дисульфид цистеин) до тиоцистеина, пирувата и аммиака с последующим неферментативным преобразованием тиоцистеина до цистеина и H2S.

     В то же время CBS использует несколько иной путь синтеза H2S, который заключается в конденсации гомоцистеина с цистеином и последующим образованием цистатионина (Lowicka, Beltowski, 2007). В качестве субстрата синтеза сероводорода могут использоваться и другие серосодержащие аминокислоты, такие как метионин и цистин.

     Фермент 3MST функционирует в комплексе с другим ферментом цистеинаминотрансферазой (CAT). Выделяют митохондриальную и цитозольную форму САТ. Используя в качестве субстрата серосодержащую аминокислоту L-цистеин и ?-кетоглутарат, СAT продуцирует 3-меркаптопируват (3МР), из которого при участии фермента 3MST синтезируется непосредственно H2S (Shibuya, 2009). В отсутствии ?-кетоглутарата синтез H2S прекращается.

     Неферментативный путь образования H2S заключается в восстановлении серы до H2S при окислении глюкозы. Так, в состоянии окислительного стресса наблюдается активация фосфоглюконатного пути, в результате чего происходит усиление синтеза NADP, использующегося в различных антиоксидантных реакциях, результатом которых является образование H2S. Однако H2S может образовываться в результате непосредственного взаимодействия NADP с элементарной серой. Еще одной возможностью неферментативного синтеза H2S является его получение из глутатиона (Гусакова, 2015).

12

1.4	H2S как трансмиттер сигнала на уровне клетки

В последние десятилетия научное сообщество изменило свое мнение

о сероводороде: от вредного и токсичного газа до биологически сигнальной молекулы, т. е. газотрансмиттера. Газотрансмиттеры вовлечены во внутри-

и межклеточную коммуникацию с высокой специфичностью во многих, если не во всех клетках, тканях и органах (рисунок 1.2).






























Рисунок 1.2 - Терапевтические мишени сероводорода (Ситдикова, 2014) Несмотря на то, что функция газотрансмиттеров феноменологически

сходна с функцией классических посредников (органические молекулы и Са2+), тем не менее они имеют отличительные признаки. Все нейтральные газотрансмиттеры легко проходят через клеточные и субклеточные мембраны, поскольку они растворимы в липидах. Это же свойство газотрансмиттеров исключает возможность их хранения в везикулах или органеллах (Гусакова, 2015).

     Газотрансмиттеры должны выполнять ряд задач, в том числе стимулировать соответствующие эффекторные системы синтеза или высвобождения сигнала, которые инициируют физиологические стимулы, а также вызывать биологические ответы в физиологически значимых

13

концентрациях. Было показано, что H2S выполняет роль стимулирующего или ингибирующего посредника в неврологической, сердечно-сосудистой, желудочно-кишечной, мочеполовой и эндокринной системах, а также может иметь дополнительное модулирующее и/или цитопротективное

действие. Сероводород был предложен, как про - и противовоспалительный агент. Сероводород оказывает защитное воздействие на сердце и обеспечивает эффект прекондиционирования, защищает сердце от ишемии-реперфузии. Почти все эффекты экзогенного сероводорода наблюдаются в сульфидных концентраций в десятки-сотни ммоль/л (Kenneth, 2009).

     H2S как газотрансмиттер проникает через мембраны клеток без помощи специфических транспортных молекул. В микромолярных концентрациях H2S, полученный in vitro из Na2S или NaHS, обладает цитопротекторными свойствами, которые могут быть связаны с его способностью нейтрализовать различные активные формы молекул (например, пероксинитриты, хлорноватистую кислоту и гомоцистеин). Действие H2S связано с модуляцией функционирования внутриклеточных каспаз или киназ, активацией ядерного фактора — ?В и ?В- зависимых белков (индуцибельная NO-синтаза, цикло- окисигеназа-2), а также со снижением антиапоптотического фактора Bcl-2.

     В организме H2S стимулирует антиоксидантную систему наряду с известными антиоксидантами (в т.ч. с N-ацетилцистеином, глутатионом и супероксиддисмутазой) и оказывает цитопротекторное действие.

Угнетение эндогенного синтеза H2S увеличивает цитотоксическое воздействие на клетки организма экзогенного H2S (Колесников, 2015).

     Один из основных механизмов действия H2S – модификация протеинов. H2S является сильным восстановителем и может восстанавливать двойные дисульфидные связи. Другой механизм – это присоединение дополнительного атома серы к тиоловой группе. Химическая модификация белков приводит к изменению их конформации и функциональной активности. В клетке мишенями действия H2S могут
14

быть ионные каналы, мембранные и внутриклеточные ферменты, различные протеины и т.д. (Ситдикова, 2014).

     Органоспецифическая экспрессия и молекулярная регуляция CBS и CSE были охарактеризованы множеством групп учёных. CBS является преобладающим H2S-генерирующим ферментом в мозге и нервной системе

и экспрессируется на высоком уровне в печени и почках. CSE в основном экспрессируется в печени и в сосудистых и несосудистых гладких мышцах.

Низкое содержание CSE также обнаружено в тонком кишечнике и желудке грызунов. Деятельность CBS регулируется предположительно на уровне транскрипции глюкокортикоидами и циклическим АМФ. Деятельность CBS может непосредственно ингибироваться оксидом азота (NO) и окисью углерода (CO). Она может быть активирована NO донором нитропруссида натрия в некоторой степени, который как ни парадоксально не включает NO, но включает в себя химическую модификацию фермента. Регулирование CBS было исследовано недавно. Регулирование CSE менее понятно, но есть доказательства того, что миелоидный цинковый палец 1 (MZF1) и специфичный белок 1 (SP1; также известный как фактор транскрипции Sp1) играют роли в его основной транскрипционной деятельности, и фермент может быть активирован с помощью бактериального эндотоксина. Важно отметить, что существуют существенные различия между человеческими и мышиными CBS и CSE ферментами (WU, 2016).

Сероводород в сердечно-сосудистой системе.

     Основным H2S-продуцирующим ферментом в сердечно-сосудистой системе является CSE. Иммуногистохимические исследования и обратная полимеразная цепная реакция показали, что CSE экспрессируется в гладкомышечных клетках сосудов и не обнаружена в эндотелиальных клетках.

     Глибенкломид, блокатор АТФ-зависимых калиевых (KATФ) каналов, ослабляет гипотензивное действие сероводорода in vivo и сосудорасширяющее действие in vitro. Сероводород увеличивает АТФ-
15

зависимый ток в этих каналах и индуцирует гиперполяризацию в изолированных гладкомышечных клетках сосудов. Ингибиторы CSE снижают проводимость KATФ каналов, подтверждая участие эндогенного сероводорода в поддержании их функционирования на базисном уровне. Таким образом, сероводород релаксирует сосуды путем открытия KATФ каналов в их гладкомышечных клетках (Вараксин, 2012).

Сероводород в почках.

     Установлено, что эндогенный H2S необходим для защиты почек от травм и дисфункций при ишемии/реперфузии, а введение NaHS уменьшает степень возникновения дизрегуляций и морфологических изменений почек. В то же время высокие миллимолярные концентрации H2S оказывают цитотоксическое действие на клетки, приводя к активации свободнорадикальных процессов, мобилизации кальция, исчерпыванию глутатиона, внутриклеточному высвобождению железа, а также индукции путей митохондриальной клеточной гибели (Колесников, 2015).

Сероводород в пищеварительной системе.

     CBS и CSE экспрессируются в слизистой оболочке желудка, где эндогенный сероводород, очевидно, выполняет роль протективного фактора при повреждениях. Показано, что H2S снижает спонтанное или индуцированное ацетилхолином сокращение подвздошной кишки у различных видов животных, а его влияние устраняется глибенкламидом – блокатором КАТФ-каналов.

     CBS и CSE были выявлены иммуногистохимическим методом в подслизистом и межмышечном нервных сплетениях толстой кишки у морской свинки и человека. Аппликация гидросульфида натрия или L-цистеина стимулирует секрецию хлоридов тканями слизистой оболочки прямой кишки морской свинки и человека. Это влияние блокируется тетродоксином, десенситизацией афферентных нервов капсаицином и капсазерином – блокатором болевых TRPV1-рецепторов. Таким образом, сероводород генерируется в энтеральной нервной системе и действует на

16

содержащие болевые рецепторы сенсорные нервные окончания, что приводит к стимуляции секреторной и моторной функции кишечника.

     Показано, что экспериментальные колиты сопровождаются повышенной экспрессией CBS и CSE в слизистой оболочке толстой кишки

и увеличением экспрессии CSE в спинном мозге, а гидросульфид натрия заметно снижает гиперальгезию у животных с колитами.

     Было показано, что CSE экспрессируется в гепатоцитах и звездчатых клетках печени. Сероводород влияет на изолированные звездчатые клетки,

вызывая релаксацию стенки микрососудов печени. Релаксирующее действие экзогенного Lцистеина на звездчатые клетки и микрососуды печени ослаблены у животных с циррозом по сравнению с контрольными.

У животных и людей с циррозом отмечена повышенная резистентность сосудов печени к действию сероводорода. Имеющиеся сведения позволяют предполагать, что дефицит этого газотрансмиттера может быть одним из факторов развития портальной гипертензии. Гидросульфид натрия снижает выделение желчи и экскрецию бикарбонатов, а блокирование эндогенного газотрансмиттера пропаргилглицином приводит к противоположному эффекту.

     Известно, что слизистая оболочка толстой кишки постоянно подвергается действию сероводорода, генерируемого из сульфатов пищи бактериями-комменсалами. Предполагается, что газ бактериального происхождения может вызывать различные заболевания толстой кишки,

включая язвенный колит и рак. Известно, что сероводород стимулирует пролиферацию эпителиальных клеток кишечника крысы в культуре. Слизистая оболочка толстой кишки способна метаболизировать это соединение вследствие высокой экспрессии роданезы в колоноцитах и адаптироваться к его избытку.

     Сероводород угнетает секрецию инсулина. Считается, что в регуляции секреции этого гормона главную роль играют КАТФ-каналы панкреатических ?-клеток. Увеличение содержания глюкозы приводит к накоплению в этих клетках аденозинтрифосфата, блокаде КАТФ-каналов,
17

деполяризации плазматических мембран, поступлению кальция и секреции инсулина. Введение в клетки инсулиномы INS-1E крысы аденовируса, содержащего ген CSE и экзогенный сероводород, угнетает процесс выделения инсулина, индуцированный глюкозой. Напротив, снижение уровня эндогенного сероводорода пропаргилглицином оказывает противоположный эффект (Вараксин, 2012).



1.5 Гипергомоцистеинемия

     Гомоцистеин (ГЦ) — представляет собой встречающуюся в природе аминокислоту, которая является промежуточным продуктом обмена аминокислот метионина и цистеина (см. рисунок 1.3). Метионин – единственный источник ГЦ в организме (Хубутия и др., 2002; Баранова, Большакова, 2004; Шевченко, 2008). Метионин в составе белка поступает в организм с пищей и участвует во всех реакциях, где метильная группа используется для синтеза биологически активных веществ (нуклеиновые кислоты, адреналин, креатинин и др.). Фактически прямым донором СН3-группы для этого процесса является активная форма метионина – S-аденозилметионин, который после потери метильной группы превращается

в S-аденозилгомоцистеин. Из S-аденозилгомоцистеина в результате последующего гидролиза образуется гомоцистеин (Лебеденкова, 2006;

Medina, et al., 2001).

     Необходимое низкое содержание этой потенциально цитотоксичной аминокислоты в клетках обеспечивается путем реметилирования до метионина, путем транссульфирования до цистеина или путем образования окисленных форм, преимущественно дисульфидов (Szegedi et al., 2008).













18






















Рисунок 1.3 - Пути метаболизма гомоцистеина ТГФ - активная форма фолиевой кислоты (тетрагидрофолат);

СН2ТГФ - метилентетрагидрофолат; СН3-ТГФ - 5-метилтетрагидрофолат; 5-МТГФР - 5-метилентетрагидрофолат-редуктаза; R - акцептор метильной группы (Лебеденкова, 2006).

     При реметелировании гомоцистеин приобретает метильную группу из N - 5 - метилтетрагидрофолата или из бетаина, для превращения в метионин. Реакция с N - 5 - метилтетрагидрофолатом происходит во всех тканях и витамин B12 выступает кофактором в данной реакции, в то время как реакция с бетаином ограничена в основном в печени и не зависит от витамина B12. Значительная часть метионина затем активируется АТФ с образованием S - аденозилметионина (SAM). SAM служит в первую очередь как универсальный донор метильной группы к различным акцепторам. S - аденозилгомоцистеин (SAH), побочный продукт этих реакций метилирования затем гидролизуется.

     Важно отметить, что этот гидролиз является обратимой реакцией, которая способствует синтезу SAH, и повышенные клеточные концентрации этого метаболита могут предшествовать и сопровождать все формы гипергомоцистеинемии.


19

     В процессе транссульфирования фермент цистатионин-?-синтетаза катализирует превращение гомоцистеина и серина в цистатионин, который затем подвергается гидролизу с образованием цистеина и ?-кетобутирата под влиянием фермента цистатионаза. Избыток цистеина окисляется до таурина или неорганических сульфатов или выводится с мочой. Таким образом, в дополнение к синтезу цистеина, транссульфирование эффективно катаболизирует избыток гомоцистеина (Selhub, 1999).

     При нарушении внутриклеточного метаболизма избыток гомоцистеина выводится из клетки во внеклеточное пространство и далее в кровь. Это приводит к возникновению гипергомоцистеинемии и, следовательно, токсическому воздействию на клетки эндотелия (Virdis et al., 2002). В норме примерно 80% общего гомоцистеина плазмы связано с белком, прежде всего с альбумином, в то время как остальные 20% существуют в свободной форме (см. рисунок 1.4). Свободный ГЦ

представлен окисленной (гомоцистин, гомоцистеин-цистеин) и восстановленной формой (Uel, 1995; Friedman, et al., 2001).






























     Рисунок 1.4 - Формы гомоцистеина и их концентрация в плазме крови (Лебеденкова, 2006)

20

     Увеличение уровня ГЦ способствует разрыву эндотелия. В зоне разрывов происходит осаждение соединений кальция и холестерина, что способствует образованию атеросклеротической бляшки, которая, в свою очередь, приводит к сужению просвета сосудов. Участок, пораженный

атеросклеротическим изменением, является «горячей точкой» тромбогенеза, с последующим образованием тромба, либо разрывом сосуда, инициируя развитие инфаркта, инсульта, легочной эмболии и других патологических состояний (Радченко, 2003).

     Содержание ГЦ в плазме крови здорового человека составляет 5 – 15 мкмоль/л (Jacques et al.,1999). Превышение верхнего порога нормы определяется как ГГЦ. Колебание ГЦ в плазме в пределах 15-30 мкмоль/л свидетельствует об умеренной гипергомоцистеинемии, от 30 до 100 мкмоль/л о промежуточной, а свыше 100 мкмоль/л – о тяжелой (Мухин, Моисеев, Фомин, 2001; Родионов, Лентц, 2008; Шевченко, Олефриенко, 2002; Refsum, et al., 1985; Welch, Loscalzo, 1998; Jacques, et al., 1999; Warren, 2002).

     Причины, приводящие к нарушению метаболизма ГЦ и развитию гипергомоцистеинемии, разнообразны. Гипергомоцистеинемия может быть обусловлена генетическими дефектами ферментов, обеспечивающих процессы обмена данной аминокислоты. Самый частый генетический дефект – мутация гена цистатионин-?-синтетаза, дефект или отсутствие которой способствует нарушению превращения ГЦ в Cys, что и является причиной развития ГГЦ (Хубутия и др., 2002; Хубутия, Шевченко, 2004; Nygard et al., 1999).

     Несбалансированная диетическое питание, содержащие низкое содержание фолиевой кислоты, витаминов В6, В12 очень часто приводит к торможению или блокированию соответствующих метаболических путей. (Giltay, Hoogeveen, Elbers, Gooren, Asscheman and Stehouwer,1998).

      На уровень гомоцистеина в крови оказывает влияние употребление кофе. Механизм действия заключается в том, что кофеин ингибирует метионинсинтетазу (Nygard et. а1., 1997).
21

     Среди причин, которые могут спровоцировать рост гомоцистеина в крови, надо отметить прием наркотических веществ. Сильные психологические стрессы так же могут рассматриваться в качестве причины гипергомоцистеинемии. Малодинамичный образ жизни относиться к инициирующим факторам этой патологии. А систематические физические нагрузки, наоборот, выступают в роли стабилизирующего воздействия на уровень гомоцистеина, приводя его к нормальным значениям (Brattstrom et al., 1998).

     Курение - мощная детерминанта гипергомоцистеинемии. Оно вызывает уменьшение содержания в крови витаминов В6, В12 с помощью цианидов, присутствующих в табачном дыме, которые ингибируют метаболизм этих витаминов (Brattstrom et al., 1998).

     Прием некоторых препаратов лекарственного назначения могут приводить к транзиторному повышению уровня гомоцистеина, например,

закись	азота	при	анестезии	ингибирует	метионинсинтетазу;

метилпреднизолон снижает концентрацию витамина В6, эстрагенсодержащие контрацептивы, противосудорожные препараты нарушают обмен фолиевой кислоты в печени, теофиллины – конкурентные ингибиторы фосфодиэстеразы, вызывают снижение метаболизма витамина В6.

     Вызывать сдвиги в метаболизме гомоцистеина могут морфофункциональные изменения различной этиологии почек. Так исследования показали, что хроническая недостаточность увеличивает риск летального исхода от сердечно – сосудистых заболеваний. Предполагается, что это может быть связано с уменьшением уровня выведения креатинина и гомоцистеина, а также с нарушением окисления гомоцистеина до СО2 и сульфатов в нефроне, увеличением экскреции фолатов, что в конечном результате ведет к повышению концентрации гомоцистеина в крови (Al-Obaidi et al., 2001).




22

1.6 Патологические процессы при гипергомоцистеинемии.

Оксидативный стресс

     Понятие «оксидативный стресс» за последнее десятилетие претерпело значительную эволюцию. Если в конце 1980-х годов под «оксидативным стрессом» понимали только активацию процессов свободно-радикального окисления биомолекул, то в последние годы свободные радикалы стали рассматривать еще и как внутриклеточные мессенджеры, участвующие в поддержании физико-химических свойств биологических мембран, регуляции состояния внутриклеточных редокс-систем, активности протеинкиназ и регуляции таких клеточных реакций как пролиферация, дифференцировка и апоптоз (Меньщикова и др., 2006).

     Обширный класс АФК можно определить, как высокореакционные, преимущественно радикальные, кислородные соединения, образующиеся в результате неполного восстановления молекулярного кислорода или изменения спина одного из его электронов, находящихся на внешних орбиталях. Свободные радикалы образуются при эндогенных реакциях и из экзогенных источников. Экзогенные источники наработки АФК — это

ксенобиотики, сигаретный дым, полютанты, УФ-освещение, ионизирующая радиация. Супероксид и пероксид водорода в больших концентрициях вырабатываются по данным путям превращений, реагируют с переходными металлами (Fe2+ и Cu2+), в результате чего образуются высокореактивные гидроксильные радикалы, которые могут вызвать свободнорадикальное окисление белков (химические модификации полипептидной цепи, окисление боковых групп аминокислотных остатков, модификация б.......................
Для получения полной версии работы нажмите на кнопку "Узнать цену"
Узнать цену Каталог работ

Похожие работы:

Отзывы

Очень удобно то, что делают все "под ключ". Это лучшие репетиторы, которые помогут во всех учебных вопросах.

Далее
Узнать цену Вашем городе
Выбор города
Принимаем к оплате
Информация
Наши преимущества:

Экспресс сроки (возможен экспресс-заказ за 1 сутки)
Учет всех пожеланий и требований каждого клиента
Онлай работа по всей России

По вопросам сотрудничества

По вопросам сотрудничества размещения баннеров на сайте обращайтесь по контактному телефону в г. Москве 8 (495) 642-47-44