Ботаническая характеристика и биологические особенности рода Calendula L

ВВЕДЕНИЕ

     В настоящее время актуальным остается вопрос о расширении номенклатуры отечественных препаратов, в том числе и на основе лекарственного растительного сырья. Как известно, из произрастающих на Земле высших растений лишь около 10 – 15% исследовано на наличие биологически активных веществ. Проводить скрининговые исследования остальных 85 – 90% видов нерационально, кроме того, такие исследования требуют серьезного вложения материальных средств. Поэтому первостепенное значение приобретает анализ информации о растениях, уже накопленной в академической и народной медицине, и разработка системного подхода к ее оценке [ ].
     В последние годы наблюдается сокращение запасов, а зачастую и уничтожение многих ценных видов растений в связи с нерациональным отношением к сырьевому потенциалу нашей страны, а для производства фитопрепаратов необходимо наличие достаточной стабильной сырьевой базы, обеспечить которую в настоящее время могут только культивируемые растения [  ].
     Анализ литературных источников свидетельствует о наличии в маслах семейства Asteraceae значительного количества биологически активных веществ: жирных кислот, фосфолипидов, витаминов и др. Эти вещества обладают ранозаживляющими, противовоспалительными, антисептическими и другими свойствами.
     Календула, или Ноготки (лат. Calendula) - род лекарственных травянистых растений семейства Астровые (Asteraceae). Род насчитывает около 20 видов, представители рода встречаются в природных условиях в Средиземноморье, Западной Европе и в Азии. Во многих районах умеренного климата ноготки размножаются самосевом в не слишком суровые зимы [  ].
     Календула обладает выраженными бактерицидными свойствами в отношении многих возбудителей болезней, особенно стафилококков и стрептококков. Из нее делают настойки, отвары и полоскания, применяют для лечения заболеваний горла и ротовой полости, используют в косметических рецептах.
     Стебли календулы ветвистые, прямостоячие, слегка опушенные. Листья светло-зеленые, овальные, расположены в очередном порядке. Все части растения обладают специфическим, довольно приятным ароматом.
     Самый распространенный вид - Календула лекарственная (Calendula officinalis L.). Как декоративное растение множество сортов, от вида. Селекция календулы в двух – и декоративном. Медицинские сорта больше веществ, а направление развивается по пути культиваров с махровыми цветками на цветоносах (Pacific Beauty) и форм для и (Calypso). Но следует отметить, что все разновидности тоже целебные свойства.
     В научно-практической только календулы лекарственной находят применение в виде настоек, мазей, галеновых препаратов и др., широкий фармакологической активности. На основе календулы нет того, что они не изучены с точки зрения        
     [ Орловская, Ушакова, Маринина, 2013].
     Встречаются об масла из календулы при лечении язвы желудка, а кожных ран. Известно, что масла семян календулы на поверхность сроки заживления, эпителизации, т.е. репаративной активностью.
     Календула относительно неприхотливое, в растение. с лета и до самых заморозков. цветение было и обильным, регулярно обламывать цветоносы с семенами. Если куст высокий, то основной волны цветения срезать его наполовину. такой интенсивно растут боковые с цветками.
     Цель исследования: на изучения источников изучить характеристику, особенности и практическое значения рода Calendula L.
     Задачи исследования: 
     •	ознакомиться с морфо-биологическими представителей рода Calendula L.;
     •	выяснить современные исследований рода Calendula L.;
     •	рассмотреть особенности выращивания лекарственной.
     Биотехнология основана на методах клеток и тканей. клеток, и растений называется отдельных клеток, а тканей и на искусственной среде в условиях. Этот лежит в основе биологии клетки, вне организма. клеток высших может с трех зрения – как уникальная биологическая система, как в физиологии, и растений и как для исследований и биотехнологии. Популяциям растительных клеток, в условиях, присущи специфические особенности, которым клеток и растений представляет новую созданную систему. культивируемых клеток от организма, специально путем создания биохимических мутантов, или клеток, помогают глубже в процессов, в растении. В качестве биологической клетки in vitro представляют для физиологов и растений, а также генетиков. степень такой зависит от изучаемого процесса. клеток, как правило, адекватной для тех процессов, протекают в растительной клетке, от существующих контроля. Для тех функций, где принципиальную роль механизмы контроля развития, может быть неадекватной. клеток широко в самых разнообразных и исследованиях. На основе культивируемых и высших в время и активно перспективные, новые для различных отраслей и хозяйства.
     
     
     
     
     
     
    
    
    
    
    
    
    
    
    
    
     
РАЗДЕЛ 1. ЛИТЕРАТУРНЫХ ДАННЫХ

     1.1. Ботаническая характеристика и особенности рода Calendula L.

     Систематическое положение рода Calendula L.
     Отдел        Magnoliophyta
     Класс        Magnoliopsida
     Порядок   Asterales
     Семейство Asteraceae
     Род           Calendula
     Вид          Calendula officinalis L.
     
     Научное растения от латинского слова «calende», что «первый день» или «календарь» и на продолжительное, на нескольких месяцев, его цветение. А название, в том и - «нагідки», дали за ногтеподобную форму его [Блинов, Яковлева, 1990].
     Календула, или (лат. Cal?ndula) - род растений Астровые (Asteraceae).
     Однолетнее растение до 50 – 60 см со ароматом. округлый, прямостоячий, разветвленный. Листья очередные, удлиненнообратнояйцевидные, черешковые, - ланцетовидные, сидячие. золотисто-желтые или оранжевые, в (диаметром 4 – 7 см) корзинки. Корзинки многоцветковы, обёртка из 1 – 2 рядов удлиненных листочков. цветки язычковые, пестичные, с рыльцем, внутренние трубчатые, обоеполые, но бесплодные, с рыльцем. Плод - изогнутая семянка. располагаются в 2 – 3 ряда, они (до кольцевидных), гетероморфные: наружные по и поверхности от и внутренних. Цветет с июня по октябрь, созревают в июле-сентябре. цветения и созревания очень из-за числа высших порядков. Размножается семенами. как и декоративное растение, дичает. не к теплу, влаге, почве, но светолюбиво. В виде в Европе, Азии и на Востоке [Комаров, 1961].
     Род 12 – 20 видов, из них:
     * Calendula arvensis L. -  Календула полевая
     * Calendula bicolor RAF.
     * Calendula eckerleinii OHLE
     * Calendula lanzae MAIRE
     * Calendula maderensis
     * Calendula maritima GUSS
     * Calendula maroccana BALL
     * Calendula meuselii OHLE
     * Calendula officinalis L. — Ноготки лекарственные, или Календула лекарственная
     * Calendula stellata CAV.
     * Calendula suffruticosa VAHL
     * Calendula tripterocarpa RUPR.
     Календулу лекарственную не зря к растениям. Хотя по происхождению это является южным, оно переносить резкие колебания и температур и даже кратковременные заморозки. продолжает до осени, даже под снегом.
     Для нормальной этому вполне температуры +8 +12 °С  - днем, и от +4 до +10 °С - ночью.
     Семена начинают при температуре от 2 до 4 °С, но лучше, по некоторым наблюдениям, при от 15 до 20 °С.
     А вот жара и сухость почвы вызывают у календулы стресс: начинает в темпах развиваться, цветения его резко и урожайность соцветий. Поэтому желательно, ноготки в и условиях, особенно в бутонизации. При погоде следует часто поливать, цветки не и не махровость. 
     Календула светолюбивое растение, растет на солнечных местах. Выращивать календулу на клумбах, в помещении или в теплице без подогрева. лишь света и циркуляция воздуха. Установлено, что интенсивности вызывает увеличение растения и времени его цветения. может расти на почвах — лесных, заболоченных, песчаных. наилучшая почва для нее — чернозем. 
     Ноготки лекарственные, или лекарственная (Calendula officinalis L.) - растение, вид рода Календула, семейства Астровые. прямостоячее высотой 20 – 75 см. Корень стержневой. толстые, ребристые, светло-зелёные, опушённые железистыми волосками. простые, очередные, светло-зелёные, удлинённые или овальные, опушены жёсткими волосками. Обёртка однорядная, с листочками. Язычковые цветки - жёлтые или оранжевые, блестящие, с стороны матовые; трубчатые - мелкие, жёлтые, или тёмно-коричневые. - корзинки диаметром 5 – 6 см (рис. 1.1). Плоды - разной и величины. Цветёт с июня до заморозков. созревают в июле - сентябре. семенами [Комаров, 1961].


     
     Рис.1.1. Соцветия Calendula officinalis L. [http://pro-cveti.ru/odnoletnie-rastenija/kalendula-lekarstvennaja.html]
     
     1.2.  Особенности использования рода Calendula L.
     
     Календула культивируется как и растение во странах Западной и Европы (Германии, Австрии, Венгрии, Польши), в том в России, а в США, Азии, на Кавказе.
     Календулу разводили в количестве в XV веке во Франции. (ноготок) была любимым королевы Наваррской Валуа. И в в саду статуя с цветком календулы в руках. Календула по праву заслужила признание, ведь она на стол в красивого букета, к блюдам, а используется как от болезней и как поддержания и [Башкирцева, 2008].
     Как лекарственное календула была уже в Греции. Из письменных известно, что в XII веке применялось для лечения гнойных ран, а в XVII веке - заболеваний, скрофулеза, фурункулеза.
     Соцветия календулы до 3% каротиноидов - каротин, ликопин, неоликопин А, рубиксантин, цитроксантин, виолаксантин, флавохром, флавоксантин, хризантемаксантин и другие (всего 15 соединений). всего каротиноидов в цветах, в - в 2 раза меньше, а в - совсем мало. зависимость каротиноидов от язычковых цветков: в календулы с темно-оранжевыми язычковыми цветками их в 10 раз больше, чем в с язычковыми цветками. В цветках в содержатся цитроксантин, флавоксантин и его хризантемаксантин, а в преобладает ликопин. По каротиноидому различаются растения, в разных местностях, в в Англии, и Австралии.
     В процессе сырья каротиноидов уменьшается - 4 после их приблизительно в 6 раз меньше, чем было в материале, каротиноиды очень к и свету.
     В соцветиях выявлено 8 флавоноидов (нарцисин, рамнетин, изорамнетин-3-глюкозид, изокверцитрин и др.). Содержимое флавоноидов в зависимости от и в 0,26 – 0,91 %, богаты флавоноидами с оранжевыми соцветиями.
     В соцветиях календулы, а в органах присутствуют тритерпеновые соединения: (в состоянии и в виде эфиров) и олеаноловая (также в свободном состоянии и в виде гликозидов). Тритерпеновые спирты являются лупеола, a- и b-амирина (в арнидиол, фарадиол и g-тараксастерол, а урсадиол, гелианол, календуладиол), этерифицированы лауриновой, пальмитиновой, миристиновой и кислотами. содержимое тритерпеновых спиртов (в и виде) в достигает 5%. Из соцветий календулы полисахарид, в которого арабиноза, галактоза, глюкоза, рамноза и ксилоза.
     Основными свойствами форм и фитопрепаратов из календулы являются противовоспалительные, ранозаживляющие, бактерицидные, спазмолитические и желчегонные. гладкомышечные таких органов, как желудок, и печень, вместе с тем возбуждает секреторную активность, что усилению и желчеотделения и секреторной желудка. результаты наблюдаются при календулы с аптечной и тысячелистником обыкновенным. В действия препарата из этих растений улучшается функция печени, застой в желчном пузыре.
     Препараты календулы процессы тканей, рост и улучшают качество грануляций, более эпителизации и более рубца. При внутрь они свою противовоспалительную активность, регенерации оболочек желудка и кишечника, язв и эрозий. защитного действия препаратов складывается из агрессивности сока и повышения резистентности оболочки желудка. Календула, седативное, гипотензивное действие, способствует нормализации деятельности и отеки.
     В народной отмечают противовоспалительное, бактерицидное, седативное, антитоксическое, спазмолитическое, мочегонное, антимитотическое свойства лекарственной.
     Препараты календулы при артериальном давлении. При исследовании действия и токсичности галеновых препаратов было установлено, что они малотоксичны. Но календулы сильным аллергеном, ее галеновые препараты осторожно лицам с аллергологическим анамнезом. случаи шока при настойки календулы.
     Применяют как ранозаживляющее, и средство: - как желчегонное, - при ангине, желудочно-кишечных заболеваниях, воспалительных печени, для пародонтоза; мазь - при ушибах, порезах, фурункулёзе, ожогах, раны; «Калефлон» - как противоязвенное средство.
   В народной отвар - при печени; для предупреждения выкидышей у после ушиба; при кровотечениях, женских заболеваниях, лихорадке, простуде; им раны; при и детских экземах.
     Сок (внутрь) - при стенокардии, болезни, атеросклерозе, и климаксе; для гастрита, болезни и двенадцатиперстной кишки, колитов, энтероколитов; (в виде полосканий) - при насморке; в виде - при проктитах, заднего прохода, прямой кишки; в виде - при шейки матки, белях, трихомонадном кольпите. В цветки применяются в качестве препарата при злокачественных опухолей.
     В корейской отвар и настойка при (в виде пластырей), ушибах, трещинах (в виде клизм), при и крупных нарывах. и - при и в качестве дезинфицирующего средства, а для при матки, эрозии шейки и трихомонадном кольпите (2% настойка). и используются, того, в медицине в противовоспалительного и средства при язве и двенадцатиперстной кишки, и желчных протоков, а при высоком давлении и ряде заболеваний. из порошка лепестков и кислоты - в симптоматического при неоперабельном раке желудка, а с железа в качестве антианемического средства.
     Календулу широко в и косметике. В в 1990 г. запатентовано лекарственное из календулы в виде мази для псориаза, грибковых заболеваний, экзем, нейродермита, себореи. и календулы используют для масок, обтираний, и примочек, рекомендуются при кожи, угрях, фурункулезе, а для волос. Настойка входит в разнообразных мазей, кремов, лосьонов, шампуней, вод. и календулы для косметических и ванн.
     Препараты для применения (например, тинктура, мазь, крем), из цветков, т.е. лепестков, для заболеваний рта, ожогов низкой степени, заживающих ран, фурункулов, язвы голени, тромбофлебита, пролежней и геморроя; этого они важными компонентами косметических (молочка для лица, крема, и соли для и детской косметики) по за и ее защите.
     Примочки и настойкой и сокращают поры на лице, салоотделение, при себорее, и угрях. Календула - средство от и волос. Вещества, содержащиеся в цветках, обменные в кожи, оказывают седативное действие, раздражение и воспаление. они в состав косметических и лосьонов. календулы используется для постакне, отеки, заживляет (лечение ожогов, экземы, дерматитов), кожу, антиоксидант, обладает противовозрастным эффектом (используется для кожи всех типов).
     Цветки используются в промышленности при маргарина, масла, сыра и других для и ароматизации. применяется в косметике, входит в различных кремов. Из получают краску. 
      
     1.2. Биотехнологические основы и клеточных растений.

     Культивирование клеток представляет собой процесс, которого in vitro отдельные клетки (или клетка) и искусственно выращиваются в условиях.
     Важные для хозяйства технологии in vitro разработаны с объектов сложности организации, начиная с протопластов и изолированными или зародышами. культивируемые имеют значение, или непосредственным генетических манипуляций, или этапом других технологий.
     Например,  животных  широко  для  не  фундаментальных задач, но и на  народного  (получение  и  для  с вирусными, бактериальными,  болезнями;  наследственных болезней,  тканей,  и  с  признаками).
     Практическая  биотехнологии  значительно шире:  не  клеточную  как  биологических веществ, но и  растения с  качественными  (сбалансированным  жиров,  аминокислот,  содержанием углеводов,  хранением),  против  и  стрессовых  окружающей  (болезней, вредителей, вирусов, вироидов, бактериозов, засоление, закисление почв, гербицидов),  синтезом  активных веществ,  к фиторемедиации.         Масштабность  использования  клеток  обусловлена ??тем, что  клетке  тотипотентность -способность фенотипически  наследственную информацию,  закодирована в ДНК ядра, то есть  клеток  тканей  дедифференциации (с  созданием  условий)  часть или весь  (реализовывать омнипотентнисть) и  начало растениям-регенерантам. В  растительных  in vitro  все  морфогенеза,  высшим растениям:  корней, стеблей, цветков, зародышей. [Агропромиздат, 1990].
     Клеточные технологии, на in vitro органов, тканей, и изолированных высших растений, облегчить и ускорить традиционный создания сортов и видов. Они предлагают принципиально пути, как сомаклональная изменчивость, на уровне, селекция, соматическая гибридизация для генетического и форм с искомыми признаками. того, технологии в безвирусного материала размножаемых растений.
     Пионером клонального микроразмножения французский Жан Морель, в 50-х прошлого получил первые растения-регенеранты орхидей. В это время техника апикальных in vitro была уже разработана. Как правило, в первичного экспланта использовали меристемы растений: гвоздики, хризантемы, подсолнечника, гороха, и т.д. В стране по микроклональному были в 30-х в лаборатории тканей и Института растений Российской наук. Под Р.Г. Бутенко были условия микроразмножения картофеля, сахарной свеклы, гвоздики, и др. и промышленные технологии. В исследования по микроклональном размножении были и растения.    [Р.Г. Бутенко,1999].
     Первые по тканей растений были Готре и в 20-х годов ХХ-го Готре показал, что ткани растений к каллусогенезу in vitro. Но первые - регенеранты осины, до почвенной культуры, были лишь в 60-х Матесом.
     Культивирование хвойных in vitro долгое время использовалось как исследования. Это было со специфическими культивирования тканей, из растения. Известно, что древесные, и хвойные характеризуются медленным ростом, укореняются, большое вторичных соединений (фенолы, и т.д.), в тканях активируются. Окисленные обычно деление и рост клеток, что к гибели первичного экспланта или способности тканей растений к адвентивных почек, с возрастом растения-донора практически полностью. В время, на перечисленные трудности, более 200 древесных из 40 семейств, были in vitro (каштан, дуб, береза, клен, сосна, ель, и др.) [Широков, Крюков,2012].
     В время, клеток растений имеют две применения. - с биологии клетки, существующей вне организма, ведущую роль культур в фундаментальных по и физиологии, биологии и цитологии растений. растительных присущи специфические особенности: генетические, (зависящие от дифференцированной активности генов) и физиологические. При культивировании гетерогенной по этим популяции идет клеток, и генотип соответствуют условиям выращивания, следовательно, популяция эволюционирует. Все это считать, что клеток являются экспериментально биологической системой, особенности которой пока мало изучены. клеток и могут адекватной моделью при метаболизма и его в и целого растения. сфера – рассмаиривает культивируемые клетки растений как микрообъекты, простые в культуре, что применять к ним не аппаратуру и технологию, но и логику экспериментов, в микробиологии. с тем, культивируемые клетки перейти к развития, при из культивируемой соматической возникает растение, к и размножению. [Кунах В.А,1999].
     Можно назвать несколько создания технологий на культивируемых тканей и растений:
     1. Получение биологически веществ происхождения:
     * традиционных вторичного (токсинов, гербицидов, роста, алкалоидов, стероидов, терпеноидов, имеющих применение);
     * синтез необычных соединений, что благодаря исходной клеточной популяции, изменчивости культивируемых клеток и отбору линий со модификациями, а в некоторых и мутагенезу;
     * культивируемые в клетки применятся как мультиферментные системы, к спектру биотрансформаций веществ (реакции окисления, восстановления, гидроксилирования, метилирования, деметилирования, гликолизирования, изомеризации). В биотрансформации уникальные активные продукты на синтетических или промежуточного обмена растений видов.
     2. Ускоренное клональное микроразмножение растений, из экпланта от 10000 до 1000000 в год, все они генетически идентичны. 
     3. Получение безвирусных растений.
     4. Эмбриокультура и оплодотворение in vitro часто применяются для постгамной несовместимости или зародыша, для растений отдаленной гибридизации. При этом яйцеклетка из с небольшой ткани перикарпа и на питательную среду. В культурах также стадии развития зародыша.
     5. Антерные – пыльников и используются для гаплоидов и дигаплоидов.
     6. Клеточный мутагенез и селекция. культуры производить регенеранты, фенотипически и генотипически отличающиеся от материала в сомаклонального варьирования. При этом в случаях обойтись без мутагенной обработки.
     7. Криоконсервация и методы генофонда.
     8. Иммобилизация клеток.
     9. Соматическая на слияния протопластов.
     10.Конструирование клеток введения клеточных оганелл.
     11.Генетическая трансформация на и уровнях.
     12. Изучение системы «хозяин – паразит» с вирусов, бактерий, и насекомых) [Кучко, 1986].
     Преимущества использования культур в следующем:
     * решается дефицита сырья, ценных исчезающих растений, не плантационному культивированию;
     * возможно фитомассы, полностью от гербицидов, пестицидов, металлов и др.;
     * имеется получения веществ, не синтезируемых соответствующим растением;
     * возможно биосинтезом продуктов за счет условий культивирования, питательной и способами;
     * имеется индустриализации и удешевления производства БАВ, которых пока не или дорог [Баев, 1984].
     
     1.3.1. Краткая история метода клеток, и растений.
     
     Клеточная базируется на способности клеток к и in vitro, их тотипотентности и регенерации. Метод культивирования тканей на питательных в условиях in vitro применяют в для и ценных генотипов, в эмбриогенезе, посадочного материала, для продуктов вторичного метаболизма, в форм растений, к и биотическм окружающей и т.д.
     Роль изолированных и в биотехнологии рассматривать в трех направлениях.
     Первое связано со способностью изолированных клеток ценные для медицины, парфюмерии, и отраслей вещества вторичного синтеза: алкалоиды, стероиды, гликозиды, гормоны, масла и др. Как правило, вещества из каллусной ткани, на (агаризованной) или жидкой (суспензионная культура) среде. На клеточных технологий такие препараты, как диосгенин из диоскореи, аймолин из раувольфии змеиной, вещества из женьшеня, используемые в и парфюмерии. культивируемых в результате селекции значительно продуктивность целых растений. такого получения вторичного синтеза является возможность для этой цели растения, не произрастающие в природных условиях, и продукцию год.
      Второе направление с культуры тканей для размножения и посадочного материала. Этот метод, клональным микроразмножением растений, получать от меристемы тысяч в год.
     Третье базируется на использовании изолированных в растений, возможность получать быстрорастущие растения, к неблагоприятным среды: засуха, засоление, и температуры, фитопатогены, тяжелые и др. с тем это предусматривает создание новых путем изолированных и неполовых (соматических) гибридов. в протопласты генов методами инженерии получать в растения с новыми наследуемыми свойствами. 
     Культивирование пыльников и на искусственных средах дает получать гаплоиды, культивирование позволяет растения из (с плохо развитым эндоспермом) семян. в позволяет преодолеть нескрещиваемость растений.
     Успех в культуры и в первую очередь от физиологических процессов, обеспечивающих нормальное клеток, их и из них взрослых растений. сложной регенерация из клеток. В первую это злаковых растений. важнейшее имеет выяснение морфогенеза in vitro, регенерации и в их процессов.
      Попытки культивировать от ткани давно, и в истории развития метода выделить этапов.
       I этап (1892 - 1902 гг.) с таких немецких исследователей, как Г. Хаберландт, X. Фёхтинг, С. Рехингер. Они пытались в сахарозы растительные ткани. Для сегментов одуванчика и был первичный и определен минимальный сегмента, к каллусогенезу. Не положительных результатов, эти высказали ряд идей и гипотез, подтвердились позже. Так, Хаберландт выдвинул о тотипотентности живой растительной клетки, то есть клеток свой потенциал развития и начало целого при условиях культивирования.
      II этап (1902 - 1922 гг.) созданием первых сред для тканей животных. Эти были природного и содержали, как правило, крови и зародышевую жидкость. вырастить растительные на искусственных питательных средах, растительные экстракты, неудачными, так как в использовались мало для ростовой активности и высших растений.
      III этап (1922 - 1932 гг.). В этот период друг от американский В. Робинс и ученый В. Котте возможность культивирования на питательных меристемы корня томатов и кукурузы. через время ткани и погибали. развитие культуры растений с 1932 г.
     IV этап (1932 - 1940 гг.) связан с французского Р. Готре, который возможность культивирования в in vitro растительных за счет пересаживания их на свежую питательную среду. Это дало толчок в по ткани, который нарастающим новых объектов, введенных в культуру.
      V этап (1940 - 1960 гг.). С в 1955 г. нового фи тогормонов-цитокининов, и в частности кинетина, была возможность стимулировать клеток ткани паренхимы табака, лишенной пучков и камбия. В от и соотношения роста было деление экспланта, рост каллусной ткани, морфогенез. В этот было положительное действие экстрактов типа кокосового ореха, каштана, кукурузы и растений для неорганизованного роста, и процессов в каллусных тканей и суспензий.
     VI этап (1960—1975 гг.). важным этого была профессором Ноттингемского Э.К. Коккингом метода ферментативным изолированных из и плодов и их в условиях. Позжев 1970 г. в той же С. Пауэром и было искусственное протопластов, что открыло путь к соматических гибридов. В этот же период разработан клонального микроразмножения растений в in vitro с меристемной культуры. Основоположником направления был ученый Ж. Морель, получил посадочный материал орхидей и картофеля.
      VII этап (с 1975 г. по время). быстрое развитие in vitro, изучение культивируемых объектов, методы электрослияния протопластов, методы мутагенеза и селекции, погаплоидных растений, метод культивирования с использованием протопластов и векторов, на Ti- и Ri-плазмид Agrobacterium tumefaciens и A. rhizogenes. При методов инженерии эффективный переноса генов для двудорастений. образом, за последние десятилетия был большой шаг в технических работы с тканями и растений. объектом исследования, как правило, одно- и травянистые и в случаях - древесные. [Шевелух,2008].
     
     1.3.2. Теоретические и основы и каллусных растений.
     
     Культура тканей бывает представлена каллусными или реже тканями. Каллусная — это неорганизованная пролиферирующая ткань, состоящая из дедифференцированных клеток. В они специализируются как каллусные, т. е. особым образом дифференцированными. Каллус, что «мозоль», образовываться как на изолированных кусочках (эксплантах) in vitro, так и на при поранении.
     Каллусная in vitro в бывает или желтоватого, реже светло-зеленого цвета. редко она иметь интенсивную окраску (у мандрагоры). Темно-коричневая окраска возникает чаще при каллусных и с накоплением в них фенолов. окисляются в хиноны. Для от них в питательные вносят антиоксиданты.
      Каллусная аморфна и не конкретной анатомической структуры, но в зависимости от и выращивания она быть разной консистенции: 1) рыхлой, из сильно оводненных клеток, распадающейся на мелкие агрегаты; 2) плотности с выраженными меристематическими очагами; 3) плотной, в дифференцируются элементы и проводящей системы.
      Обязательным условием дедифференцировки клетки и превращения ее в каллусную присутствие в питательной представителей двух фитогормонов: и цитокининов. вызывают дедифференцировки клетки, подготавливающий ее к делению, а цитокинины — пролиферацию (деление) дедифференцированных клеток. Если в среду без поместить стебля, листа, корня (без верхушки) или другой эксплант, состоящий из специализированных (дифференцированных) клеток, то деления клеток не и каллусная ткань не образуется. Это с неспособностью дифференцированных клеток к делению. Каждая клетка проходиттри фазы роста: 1) деление; 2) растяжение; 3) дифференцировку. чертой заключительной фазы является вторичной оболочки и потеря клеткой способности к делению. Для того чтобы дифференцированные вновь способность к делению, необходимо, чтобы их дедифференцировка, т. е. клетки как бы в меристематическое состояние. Размножение дедифференцированных клеток приводит к анархическому, росту, в результате чего каллусная ткань. образом, превращение специализированной в каллусную с индукцией клеточного деления, к она потеряла в процессе дифференцировки.
     Переход in vitro из состояния к дедифференцировке и клеточным обусловлен активности (эпигенетической изменчивостью). одних и других к изменению в составе клеток. В каллусных клетках специфические и исчезают или уменьшаются в количестве белки, для клеток листа. При дедифференцированной к пролиферации, в клетках происходят и изменения. Дедифференцировка начинается с использования запасных и разрушения клеточных органелл. 6 - 12 ч индукции дедифференцировки клеточная стенка разрыхляется и разбухает, число рибосом, число элементов Гольджи, а размеры и число ядрышек. Все эти предшествуют делений, которые начинаются через 48 - 72 ч. учитывать, что в экспланта в культивирования наблюдаться в метаболизме, какдедифференцировкой, так и синтезами. Для разделения этих лучше прединкубацию экспланта на безгормональной среде 3 - 6 сут. Каллусная имеет свой цикл и повторяет любой клетки, деление, и дифференцировку, после чего старение и клетки. Каллусную дифференцировку назвать вторичной, но ее не путать со вторичной дифференцировкой клетки, в морфогенеза.
      Для того чтобы не старения, способности к и гибели каллусных клеток, первичный каллус, на эксплантах, 4—6 переносят на свежую питательную среду. Эту называют пассированием. При регулярном пассировании к делениюможет в течение лет [Шевелух, 2008].
     
     1.3. Некоторые направления по видов рода Calendula L.
     Направления исследований, в в объета виды рода Calendula разноплановые. В Шукшиной О.Г. с изучено растительных комплексов на функциональную активность иммунокомпетентных in vitro. В экспериментах in vitro выявлено дозозависимое влияние полифенольных комплексов календулы (Calendula officinalis),крапивы двудомной (Urtica dioica) и рябины (Sorbus aucuparia) на индуцированный цитокинов и иммуноглобулинов. Культивирование митогенстимулированных мононуклеарных клеток с полифенольным комплексом календулы в дозе 500 мкг/мл к синтеза интерлейкина (IL)-2, интерферона-? (IFN?), IgM и IgG, как в дозе 50 мкг/мл не на показатели.Аналогичное наблюдали при применении полифенольных соединений (ПС) крапивы. инкубация клеток с ПС в дозе 50 мкг/мл снижение IgG. ПС в обеих оказывали подавляющее на выработку IL-2, IFN?, IgM и IgG митогенактивированными клетками. Изучаемые полифенольные комплексы в выбранных не на и продукцию IL-4 [ ].
     Исследования по водных и экстрактов на рост микроорганизмов показали, что 10 % экстракты календулы in vitro угнетают рост Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Klebsiella pneumoniae, Serratia marcescens, а 5% - Bacillus cereus, E. coli, Proteus vulgaris, Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans. Спиртовые и спиртово-масляные из соцветий проявляют более противомикробное действие, чем из высушенного сырья. экстракты активнее, чем вытяжки. Противомикробная активность масла в 10 раз выше по с отваром цветков растения. календулы и масло также антипротозойное в Trichomonas vaginalis. По L. Gracza (1987) трихомонацидную эфирного масла обусловливает его фракция, в которой моно- и сесквитерпеноиды.

РАЗДЕЛ 4. ТРУДА
Все работы с клеток и in vitro в биотехнологической лаборатории в (асептических) в боксе или ламинар-боксе, инструментами, в стерильной посуде, на питательных средах. Чаще для стерилизации (боксов для тканей, культуральных комнат) ультрафиолетовое в 0,5–2 (в зависимости от помещения). ультрафиолетовыми (260 нм) – часто в для помещений, настольных боксов. При воздействии эти лучи гибель всех бактерий. погибают быстро, а грибов медленнее. Поэтому в устанавливают лампы БУФ-15 или БУФ-30, которые включаются на 30 за 1 час до работы. того, проводить профилактическое боксов. в помещении через 15–20 после бактерицидных ламп, так как под действием ультрафиолетового двухатомный воздуха О2 становится трехатомным О3 – газом, для человека. Для достижения максимальной перед УФ все тщательно отмываются средствами, и хлорсодержащих веществ, поверхности ламинар-бокса 70 % спиртом. Цель работы: методы помещений, материалов, инструментов, оборудования к с растительных тканей. и оборудование: посуда: стаканы (50, 100, 250 мл), с пробирками, чашки Петри; (пинцеты, скальпели, препаровальные иглы), средства (стиральный порошок), хромпик.

Все операции, с питательных сред, (пассированием) каллусов, эксплантов ведут в комнатах или боксах, где стерильные условия работы. бокс (ламинар) – приспособление для в условиях. условия в ламинаре 12 с тока воздуха. Ламинарное движение – движение, при струйки перемещаются параллельно, препятствие слоями. подаётся в ламинар специальные фильтры, очищают его от спор микроорганизмов, пыли и т. д. Ток воздуха, через ламинар, к исследователю, что позволяет освобождать пространство ламинара от спор микроорганизмов.
1. В биотехнологической лаборатории влажную с агентами.
2.  Для стерилизации началом работы лаборатории и пространство ламинара облучить УФ-лучами (0,5 – 1 ч). 
3. Непосредственно работой необходимо внутренние ламинара 70 % этилового спирта, в нем инструменты и материалы: в посуде, (горелку), спички, простерилизованный и посуду. 
4.  Все с материалом проводить либо на поверхности бокса, либо в простерилизованных чашках за спиртовой горелки. 
5.  При с необходимо перед каждой помещать их (скальпель, препаровальную иглу, и т. д.) в со спиртом, прожигать в пламени горелки. инструмент для используется единоразово!!! 
6. После работы привести место в порядок: поверхность моющим средством (или раствором). бокса, стаканчика с и горелки, не оставлять!
Питательная среда – фактор культивирования органов, тканей и растений. компо- нентами сред минеральные соли (макро- и микроэлементы), углеводного (сахароза), вита- мины и регуляторы (фитогормоны). в питательных сред входят органические (гидролизат казеина, кокосовое молоко, экстракт, кукурузы). по бывают твердыми или агаризованными, и жидкими, в зависимости от цели исследования. Для твердых сред используется агар-агар. среды железо в хелатированной форме, обеспечивает его растению. тканей, культивируемых in vitro, способны все для витамины. Но на первом – при в культуру, добавлять витамины. Для регуляции и неоходимы регуляторы роста. соотношение и этих веществ, можно направленно их действие. рас.......................